БИОФИЗИКА, 2023, том 68, № 4, с. 660-666

БИОФИЗИКА КЛЕТКИ

УДК 577.3

СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОСТУПЛЕНИЯ

НАТРИЙ-МЕДНОГО ХЛОРОФИЛЛИНА В ЛИМФОЦИТЫ

*Государственный научный центр Российской Федерации - Федеральный медицинский биофизический центр

имени А.И. Бурназяна ФМБА России, ул. Маршала Новикова, 23, Москва, 123098, Россия

**Российский биотехнологический университет (РОСБИОТЕХ), Волоколамское шоссе, 11, Москва, 125080, Россия

^#E-mail: rla2904@mail.ru

Поступила в редакцию 24.01.2023 г.

После доработки 24.01.2023 г.

Принята к публикации 15.02.2023 г.

Оценена возможность попадания натрий-медного хлорофиллина внутрь лимфоцитов. Для этого

фотометрическим методом определено содержание хлорофиллина в лизате лимфоцитов, предвари-

тельно инкубированных в среде, содержащей 300 мкМ медного хлорофиллина. Обнаружено боль-

шое содержание хлорофиллина, что позволяет говорить о том, что он может поступать внутрь кле-

ток. Остается открытым вопрос о том, может ли хлорофиллин проникать через ядерную мембрану.

На основе анализа собственной и представленной в литературе информации сделан вывод, что че-

рез нее хлорофиллин проходит значительно хуже, чем через плазмалемму.

Ключевые слова: лимфоциты, хлорофиллин, радиопротекторы, спектрофотометрия, трансмембран-

ный транспорт.

DOI: 10.31857/S0006302923040051, EDN: KJSRDS

Многими исследователями препараты на ос-

электрическом поле. Степень повреждений ДНК

нове хлорофилла изучались в качестве средства

тем выше, чем более выражен хвост ДНК-кометы

борьбы с различными патологиями [1-3], в том

[13-16]. Значения величин содержания ДНК в

числе с последствиями лучевого поражения. В

хвосте ДНК-кометы и момента хвоста (произве-

литературе имеются сведения и о радиозащитных

дения содержания ДНК в хвосте на длину хвоста)

свойствах препаратов на основе хлорофилла [4-

для диапазона концентраций хлорофиллина 0-

10].

100 мкМ не дали достоверных различий.

Обычно молекулярно-биологические эффек-

Для интерпретации полученных в работе [12]

ты действия ионизирующего облучения рассмат-

результатов было выдвинуто предположение о

риваются в аспекте разрушения клеточных моле-

том, что хлорофиллин в обсуждаемом исследова-

кул ДНК (в более общем смысле - повреждения

нии не попал внутрь лимфоцитов, а потому не

генетического аппарата) или в аспекте перехода

смог проявить внутри них своих антиоксидант-

клетки в состояние окислительного стресса, глав-

ных свойств. Поэтому возникла необходимость

ным образом - запуска реакций перекисного

изучить способность хлорофиллина к проникно-

окисления липидов. При этом препараты на ос-

вению в лимфоциты.

нове хлорофилла продемонстрировали как гено-

В настоящем исследовании использована мо-

протекторные свойства [7, 8, 11], так и способ-

дельная система, аналогичная использованной в

ность ослаблять степень окислительного стресса

работе [12]. Для оценки поступления хлорофил-

[4, 9].

лина внутрь лимфоцитов после инкубации в нем

Однако в недавно проведенном исследовании

клетки были выделены из среды инкубации, по-

[12] по облучению рентгеновским излучением в

сле чего - лизированы. Далее были зарегистриро-

дозе 2 Гр суспензии лимфоцитов, проведенном

ваны спектры оптической плотности лизатов. По

методом гель-электрофореза одиночных клеток,

данным спектрам и было оценено наличие хлоро-

у натрий-медного хлорофиллина защитные свой-

филлина в лизате, а значит - и в цитоплазме лим-

ства обнаружены не были. Данный метод заклю-

фоцитов после инкубации.

чается в анализе кометоподобных структур, обра-

зующихся из содержащихся в предварительно ли-

Стоит отметить, что исследование по биодо-

зированных клетках молекул ДНК в геле в ступности натрий-медного хлорофиллина было

660

СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

661

проведено авторами работы [17] более 10 лет на-

бычьей сыворотки (Thermo Fisher Scientific,

зад. Однако они изучали возможность попадания

США), 146 мг L-глутамина («ПанЭко», Россия),

хлорофиллина в органы крыс, которым скармли-

смеси 25000 ед. пенициллина и 25 мг стрептоми-

вался хлорофиллин. При этом использовались

цина («ПанЭко», Россия).

огромные дозы хлорофиллина: 10-30 мг/г массы

Инкубирование лимфоцитов в хлорофиллине.

животного. Это многократно превышает концен-

Полученную суспензию лимфоцитов смешивали

трации хлорофиллина, использованные в работе

с 600 мкМ раствором медного хлорофиллина на-

[12]. Кроме того, авторы работы [17] оценивали

трия (CZY Prospertity Store, Китай) в среде RPMI

содержание хлорофиллина не в клетках, а в орга-

1640 (полной) в соотношении 1 : 1. В итоге лим-

нах, где он мог находиться, скажем, в межклеточ-

фоциты оказывались в 300 мкМ хлорофиллине.

ном веществе. Не удивительно, что на фотогра-

Контрольные пробы просто были разбавлены в

фиях, представленных в работе [17], почки и пе-

два раза средой RPMI 1640 (полной). Также в дан-

чень крыс, получавших хлорофиллин в дозе

ной среде были приготовлены растворы хлоро-

30 мг/г массы животного, полностью окрашены в

филлина (300 мкМ), в которые клетки не добав-

зеленый цвет: содержание хлорофиллина в орга-

лялись. Все образцы были инкубированы в тече-

нах оказалось колоссальным.

ние часа в воздушном термостате MCO-15AC

Однако анализировать результаты работы [12]

фирмы Sanyo (Япония) при температуре 37°C.

в контексте работы авторов [17] некорректно, так

Анализ поступления хлорофиллина в лимфоци-

как экспериментальные модельные системы в

ты. После инкубации в хлорофиллине пробы бы-

них слишком различаются. Необходимо также

ли центрифугированы в течение 20 мин при 200 g.

принять во внимание возможные химические

После этого из проб было взято по 8 мкл среды, к

превращения хлорофиллина в желудочно-ки-

ним добавлено 72 мкл фосфатно-солевого буфе-

шечном тракте животных. Поэтому мы и провели

ра. Далее из проб с лимфоцитами была удалена

эксперимент на суспензии лимфоцитов, анало-

надосадочная жидкость, а лимфоциты ресуспен-

гичной использованной в работе [12], с аналогич-

дированы в 72 мкл фосфатно-солевого буфера.

ным веществом.

Для оценки проникновения хлорофиллина в

лимфоциты определяли содержание вещества в

их цитоплазме. Для лизиса клеточных мембран

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

и перехода содержимого цитоплазмы в раствор к

Выделение лимфоцитов крови. Лимфоциты бы-

суспензии лимфоцитов в пробы было добавлено

ли выделены из проб крови пациентов ГНЦ

по 20 мкл 5%-го раствора тритона X-100 (при при-

ФМБЦ имени А.И. Бурназяна ФМБА России ме-

готовлении данного раствора тритон X-100 (Heli-

тодом центрифугирования в градиенте плотно-

con, Россия) был в 20 раз разбавлен деионизиро-

сти. Гепаринизированная кровь в соотношении

ванной водой). Далее пробы были инкубированы

1 : 1 была разведена фосфатно-солевым буфером,

в течение часа при 4°C.

приготовленным путем растворения таблетки бу-

После инкубации все пробы были смешаны в

фера (Thermo Fisher Scientific, США) в деионизи-

соотношении 1 : 1 с деионизированной водой.

рованной воде. Далее в центрифужные пробирки

Далее на спектрофотометре Cary 60 (Agilent Tech-

добавляли по 2 мл раствора фиколла плотностью

nologies, США) были зарегистрировали спектры

1.077 г/мл («ПанЭко», Россия), после чего на него

оптической плотности в диапазоне длин волн

было наслоено по 2.7 мл разведенной крови. Да-

400-800 нм. Значения оптической плотности об-

лее пробы центрифугировали при 400 g в течение

нуляли по пробе, содержащей 0.5%-й раствор

30 мин. Опалесцирующее кольцо, содержащее

тритона X-100 и среду RPMI 1640 (полную), раз-

мононуклеары, было отобрано в чистые центри-

бавленную в 25 раз.

фужные пробирки с добавлением 10 мл фосфат-

но-солевого буфера. Далее пробы были центри-

фугированы при 300 g в течение 15 мин, после че-

РЕЗУЛЬТАТЫ

го осадок был ресуспендирован в добавленных

Сравнение результатов измерений количества

5 мл фосфатно-солевого буфера. Затем пробы

хлорофиллина в лизатах лимфоцитов и в среде, в

снова были центрифугированы при 300 g в тече-

которой они инкубировались, показало, что, во-

ние 10 мин, а полученный осадок - ресуспенди-

первых, хлорофиллин попадает в клетки, а во-

рован в добавленных 5 мл фосфатно-солевого бу-

вторых, что он там накапливается: темп проник-

фера. После этого пробы еще раз были центрифу-

новения хлорофиллина в клетку выше, чем

гированы при

300 g в течение

10 мин с

из нее.

последующим ресуспендированием осадка в 1 мл

среды RPMI 1640 (полной). Среда была приготов-

Стоит отметить, что используемая в настоя-

лена путем добавления к 500 мл среды RPMI Me-

щем исследовании концентрация хлорофиллина

dium 1640 1x (GIBCO (Life Technologies (Invitro-

в три раза выше максимальной, использованной

gen)), США) 50 мл инактивированной фетальной

в исследовании [12]. Это было сделано для более

БИОФИЗИКА том 68

№ 4

2023

662

РОМОДИН

Рис. 1. Усредненные спектры оптической плотности образцов: (а) - непосредственно зарегистрированные спектры, без

вычета вклада гемовых белков; (б) - спектры оптической плотности с учетом поправки на вклад гемовых групп.

Сплошная черная линия - лизат лимфоцитов, инкубированных в хлорофиллине; пунктирная черная линия - среда с

хлорофиллином, в которой инкубировались лимфоциты после удаления их из нее; точечная линия - раствор

хлорофиллина, аналогичный тому, в котором инкубировались лимфоциты; сплошная серая линия - лизат лимфоцитов,

инкубированных в среде без добавления хлорофиллина; пунктирная серая линия - среда без хлорофиллина, в которой

инкубировались лимфоциты после удаления их из нее.

точного спектрофотометрического определения

Спектр оптической плотности пробы, таким

хлорофиллина в лизатах лимфоцитов. Однако все

образом, представляет собой спектр суммы опти-

концентрации - и используемая в настоящей ра-

ческих плотностей ее компонентов [23], главны-

боте, и применяемые в работе [12], имеют один

ми из которых являются хлорофиллин и гемовые

порядок. Поэтому концентрацию хлорофиллина,

белки. Поэтому для того, чтобы увидеть спектры

выбранную в настоящем исследовании, можно

оптической плотности именно хлорофиллина,

считать адекватной.

необходимо из спектров поглощения проб, со-

держащих хлорофиллин, вычесть спектры погло-

Спектры поглощения лизатов лимфоцитов,

щения соответствующих проб, не содержащих

инкубированных в 300 мкМ хлорофиллине и в

его: из спектра, обозначенного на рис. 1а сплош-

среде без него, среды без лимфоцитов после ин-

ной черной линией, был вычтен спектр, обозна-

кубации и среды с хлорофиллином, в которую

ченный сплошной серой линией, а из обозначен-

клетки не добавлялись (контрольный раствор),

ного пунктирной черной линией - обозначенный

представлены на рис. 1а. Изначальные растворы

серым пунктиром. Полученные спектры оптиче-

(среда после инкубации и контрольный раствор)

ской плотности представлены на рис. 1б.

в процессе подготовки пробы для измерения оп-

На основании проиллюстрированной рис. 1б

тической плотности разбавлялись в 25 раз. При-

информации можно говорить о том, что по срав-

мерно в такое же число раз в процессе пробопод-

нению с контрольным, не содержащим клетки,

готовки была разбавлена цитоплазма лизирован-

раствором хлорофиллина, концентрация данного

ных лимфоцитов.

вещества в среде после инкубации лимфоцитов

Натрий-медный хлорофиллин имеет макси-

снизилась. В то же время в лизатах этих лимфоци-

мумы поглощения на длинах волн 404 нм и 628 нм

тов содержание хлорофиллина было выше, чем в

[18]. При интерпретации результатов представля-

контрольном растворе.

ет проблему схожесть спектров поглощения гемо-

Мы вычислили значения концентраций хло-

вых белков с таковым для хлорофиллина [19-21].

рофиллина в этих пробах, используя значение ко-

Гемовые белки, очевидно, присутствуют в соста-

эффициента молярной экстинкции, равное

ве лимфоцитов, а также могут оказаться в среде

11100 л/моль∙см (приведено в работе авторов [18]).

инкубации, попав в нее из плазмы крови. Наибо-

Данные результаты иллюстрирует рис. 2.

лее выраженный максимум поглощения прихо-

дится на так называемую полосу Соре - область

Статистический анализ результатов, представ-

402-410 нм [18, 22], соответствующую порфири-

ленных на рис. 2, с использованием критерия

новым группам, входящих в состав как хлорофил-

Манна-Уитни показал достоверные отличия

лина, так и гемовых групп.

между всеми пробами.

БИОФИЗИКА том 68

№ 4

2023

СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

663

трансмембранного переносчика гема был описан

белок-продукт экспрессии гена SLC46A1 [25].

Однако несколько позже было сказано, что он -

переносчик фолиевой кислоты [26] (впрочем,

здесь, к примеру, остается открытым вопрос, по-

чему экспрессия этого переносчика увеличивает-

ся в условиях гипоксии [27]). При этом продол-

жают поступать новые сведения о способности

данного белка, называемого

«heme carrier

protein 1», переносить через мембрану гемовые

группы [28].

В целом же известно, что белки, связывающие

гем, присутствуют почти во всех клеточных ком-

Рис. 2. Сравнение концентрации хлорофиллина в сре-

партментах, однако молекулярные механизмы,

де после инкубации лимфоцитов (2), лизате лимфоци-

регулирующие транспорт гема внутри клетки,

тов (3) и в среде с добавлением хлорофиллина, анало-

остаются по сей день малоизученными [29]. Во-

гичной той, в которой проводили инкубацию (1). Так

как объем выделенных лимфоцитов составлял при-

прос о том, есть ли какие-либо переносчики пор-

мерно 8 мкл, для проб 1 и 2 отбирали по 8 мкл раствора.

фиринов и их производных в ядерной мембране,

Далее к образцам добавляли 72 мкл фосфатно-солево-

остается открытым. Поэтому вполне вероятно,

го буфера, после чего - 20 мкл 5%-го раствора тритона

что и в плазмалемме лимфоцитов имеется систе-

X-100 в фосфатно-солевом буфере.

ма для переноса металлопорфиринов из межкле-

точной среды в цитоплазму, и именно она спо-

собна через мембрану транспортировать хлоро-

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

филлин.

Описанное выше наличие хлорофиллина в ли-

Таким образом, с учетом вышесказанного,

затах лимфоцитов свидетельствует о том, что он

можно утверждать, что хлорофиллин способен

мог находиться в их цитоплазме, а возможно, и в

проникать через плазмалемму внутрь клеток. Но

ядре. Очевидно, что попасть туда он мог только из

тогда встает вопрос, как трактовать результаты

среды инкубации. Таким образом, хлорофиллин

исследования [12] о невлиянии хлорофиллина на

имеет способность каким-то образом проникать

степень повреждения ДНК лимфоцитов, облу-

через клеточную мембрану в цитоплазму лимфо-

ченных рентгеновским излучением.

цитов.

Вещество может проникать в клетку из среды

Самым банальным ответом на данный вопрос

путем простой либо облегченной диффузии или

будет предположение о неспособности хлоро-

же с помощью различных видов активного транс-

филлина проникать в ядро клетки из ее цитоплаз-

порта. Хлорофилл за счет остатка фитола имеет

мы. Тогда становится понятно, почему хло-

некоторое сродство с липидными мембранами,

рофиллин не защитил ДНК лимфоцитов от

собственно, именно за счет него он закрепляется

радиационно-индуцированного окислительного

за мембрану тилакоида хлоропластов [24]. Хлоро-

стресса. В обзоре [30], посвященном анализу ра-

филлин, использованный в исследовании [12], -

бот о свойствах хлорофилла и его производных

водорастворимая молекула, а потому неспособ-

внутри организма, большое внимание уделяется

ная диффундировать через липидный бислой. В

различным химическим превращениям упомяну-

случае диффузного попадания вещества в клетку

тых веществ в процессе метаболизма. И при этом

его концентрация в цитоплазме не может превы-

указывается, что данные свойства у хлорофилла и

шать таковую в межклеточной среде. А поскольку

многочисленных его производных сильно разли-

содержание хлорофиллина в лизате лимфоцитов

чаются.

достоверно выше, чем в среде, в которой они бы-

Если говорить о превращениях хлорофиллина

ли инкубированы (рис. 2), то можно предполо-

в пищеварительной системе, то здесь нужно

жить, что в нее он проник путем активного транс-

вспомнить, что в кислой среде он имеет тенден-

порта. При этом темп его поступления внутрь был

цию к образованию хлоринов - хлорина e₆, кото-

выше, чем обратно в межклеточную среду.

рый впоследствии может перейти в хлорин e₄.

В этом случае в цитоплазматической мембране

При этом интересно, что хлорин e₆ не усваивается

лимфоцитов должна существовать система пере-

в кишечнике, выходя с фекалиями, а хлорин e₄

носа порфиринов, которая способна также осу-

ществлять транспорт хлорофиллина.

попадает в кровь [17, 30].

В литературе имеют место сообщения об обна-

На рис. 3 представлены структурные формулы

ружении трансмембранных переносчиков пор-

медного хлорофиллина и хлоринов - его произ-

фиринов. Так, около 20 лет назад в качестве

водных.

БИОФИЗИКА том 68

№ 4

2023

664

РОМОДИН

Рис. 3. (а) - Медный хлорофиллин, R - метильная группа в хлорофиллине-a, альдегидная группа в хлорофиллине-b;

(б) - медный комплекс хлорина e₆; (в) - медный комплекс хлорина e₄.

Не исключено, что хлорин e₄ легче проникает

тический аппарат облученных животных: хлоро-

через мембраны за счет меньшего, по сравнению

филлин уменьшил у них число сестринских хро-

с хлорином e₆, числа карбоксильных групп, уве-

матидных обменов. Раскрывая полученный

парадокс, необходимо обратить внимание даже

личивающих отрицательный заряд молекулы.

не на то, что в работах [7, 8] использовалась

Анализируя информацию из обзора [30], необ-

большая, чем в работе [12], доза препарата хлоро-

ходимо помнить, что в нем речь идет о хлорофил-

филлина, а на то, что в исследовании [12] влияние

ле и его производных, поступающих в организм

хлорофиллина изучалось на суспензии лимфоци-

через желудочно-кишечный тракт и претерпева-

тов. Данные клетки в процессе исследования не

ющих в нем изменения. Главным образом, здесь

делились, а потому их ядерная мембрана (кото-

речь идет о превращении хлорофиллина в кислой

рая, скорее всего, хлорофиллин не пропускает)

среде в хлорины. Однако в настоящем исследова-

оставалась целой.

нии хлорофиллин не подвергался кислотному

воздействию. Поэтому, если в составе используе-

В работах [7, 8] исследовались изъятые у облу-

мого препарата не было хлорина e₄, данные, при-

ченных мышей быстроделящиеся клетки: клетки

веденные в разделе

«Результаты», относятся

костного мозга [8] и спермогонии [7]; то есть ис-

следуемые клетки проходили через митоз. Одна-

именно к натрий-медному хлорофиллину. К сло-

ву, в обзоре [30] имеются сведения об обнаруже-

ко общеизвестно, что в начале митоза ядерная

нии хлорофиллина в сыворотке крови человека,

мембрана разрушается, а цитоплазма и карио-

употреблявшего его. В этом случае вещество без

плазма смешиваются

[31-33]. Следовательно,

изменений дошло до его кишечника, где попало в

хлорофиллин (или хлорин e₄, в который он пре-

энтероцит, а оттуда - в кровяное русло, таким об-

вратился в организме мышей [30]), попавший в

разом, дважды проникнув через плазмалемму.

цитоплазму клетки, после митоза оказывался и

внутри ее ядра, где мог уже ингибировать радиа-

Детально рассуждать о возможных метаболи-

ционно-индуцированный окислительный стресс.

ческих путях хлорофиллина, употребленного пе-

рорально, в настоящей статье нет необходимости,

Таким образом, сопоставляя результаты на-

так как целью исследования было установить,

стоящего исследования и работ [7, 8, 12], можно

проникает ли хлорофиллин в клетки из межкле-

прийти к выводу, что хлорофиллин попадает из

точной среды. На основании информации, про-

межклеточного вещества в цитоплазму, причем

иллюстрированной на рис. 1 и 2, можно утвер-

скорее всего по механизму активного транспорта.

ждать, что проникает. Но при этом он вряд ли

Однако через ядерную мембрану в кариоплазму

проникает в ядро клетки, поэтому в работе [12] не

он либо не проходит, либо проходит очень плохо.

было обнаружено никакого его влияния на сте-

Поэтому полноценно попасть в ядро он может

пень повреждений ДНК лимфоцитов, суспензия

лишь во время деления клеток. По этой причине

которых подверглась воздействию рентгеновско-

хлорофиллин и хлорины в отношении тканей с

го излучения.

быстроделящимися клетками должны обладать

Но при этом в работах [7, 8] приводятся дан-

большим радиозащитным эффектом, чем в отно-

ные о защитном действии хлорофиллина на гене-

шении более дифференцированных тканей с не-

БИОФИЗИКА том 68

№ 4

2023

СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

665

делящимися или медленно делящимися клетка-

СОБЛЮДЕНИЕ ЭТИЧЕСКИХ НОРМ

ми. Собственно, еще с начала прошлого века из-

Настоящая статья не содержит описания вы-

вестно, что именно недифференцированные

полненных авторами исследований с использова-

ткани с быстроделящимися клетками являются

нием животных в качестве экспериментальных

наиболее радиочувствительными [34]. Поэтому

объектов.

их защита поможет уменьшить степень проявле-

ния многих синдромов лучевой болезни.

Было бы правильным высказать еще одно воз-

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

можное объяснение того, почему в лизатах лим-

T. M. Ong, W. Z. Whong, J. Stewart, and H. E. Brock-

фоцитов, инкубированных в среде с хлорофилли-

man, Mutation Res.,

173

(2),

111

(1986). DOI:

ном, он был обнаружен. Хлорофиллин мог «нали-

10.1016/0165-7992(86)90086-2

пать» на клетки сверху и оставаться связанным с

M. Ozcan, D .Aydemir, M. Bacanli, et al., Biol. Trace

их поверхностью при отмывании клеток от среды

Element Res.,

199

(12),

4475

(2021). DOI:

инкубации. Но данное явление нельзя считать

10.1007/s12011-021-02585-6

высоковероятным ввиду того, что за счет отсут-

J. P. Kamat, K. K. Boloor, and T. P. Devasagayam,

ствия фитолового «хвоста», который имеет место

Biochim. Biophys. Acta, 1487 (2-3), 113 (2000). DOI:

в молекуле хлорофилла, у хлорофиллина он не

10.1016/s1388-1981(00)00088-3

может заякориваться в липидном бислое мем-

А. В. Поздеев и В. П. Гугало, Вестн. Курской гос.

браны.

с.-х. академии, № 2, 107 (2012).

А. В. Поздеев и Н. П. Лысенко, Изв. Междунар.

академии аграрного образования, 42 (2), 60 (2018).

ВЫВОДЫ

А. В. Поздеев, В. К. Промоненков и Н. П. Лысен-

Настоящим исследованием было обнаружено

ко, Ветеринар. медицина, № 1, 42 (2010).

наличие хлорофиллина в лизате лимфоцитов, ин-

P. Morales-Ramirez and M. T. Mendiola-Cruz, Muta-

кубированных в содержащей его среде. На осно-

tion Res., 344 (1-2), 73 (1995). DOI: 10.1016/0165-

вании этого сделан вывод о том, что хлорофиллин

1218(95)90041-1

способен проникать в цитоплазму клеток через

P. Morales-Ramirez and M. C. Garcia-Rodriguez,

плазмалемму, причем, скорее всего, по механиз-

Mutation Res.,

320

(4),

329

(1994). DOI:

му активного транспорта. Однако, на основании

10.1016/0165-1218(94)90085-x

ранее проведенных исследований и анализа лите-

S. S. Kumar, B. Shankar, and K. B. Sainis, Biochim.

ратуры, был сделан вывод, что через ядерную

Biophys. Acta

1672

(2),

100

(2004). DOI:

мембрану хлорофиллин не проходит или прохо-

10.1016/j.bbagen.2004.03.002

дит очень плохо. Поэтому эффективное геноза-

10.

S. Zimmering, O. Olvera, M. E. Hernandez, et al., Mu-

щитное действие он может проявлять только в

tation Res., 245 (1), 47 (1990). DOI: 10.1016/0165-

тканях, состоящих из быстроделящихся клеток.

7992(90)90024-e

11.

S. K. Abraham, L. Sarma, and P. C. Kesavan, Mutation

БЛАГОДАРНОСТИ

Res.,

322

(3),

209

(1994). DOI:

10.1016/0165-

1218(94)90008-6

Автор настоящей статьи выражает благодар-

12.

Л. А. Ромодин и М. А. Игнатов, Радиац. биология.

ность и признательность А. А. Ларенкову, заведу-

Радиоэкология 63, (2023). DOI:

ющему Лабораторией технологии и методов кон-

13.

A. N.Osipov, N. M.Smetanina, M. V.Pustovalova,

троля радиофармпрепаратов, и В. Б. Бубенщико-

et al., Free Radic. Biol. Med., 73, 34 (2014). doi:

ву, инженеру Циклотронной лаборатории ГНЦ

10.1016/j.freeradbiomed.2014.04.027

ФМБЦ имени А.И. Бурназяна ФМБА России, за

предоставленную возможность проведения изме-

14.

I. B. Korzeneva, S. V. Kostuyk, L. S. Ershova, et al.,

рений на спектрофотометре.

Mutation Res., 779, 1 (2015). DOI: 10.1016/j.mrfm-

mm.2015.05.004

15.

P. L. Olive, J. P. Banath, and R. E. Durand, Radiation

ФИНАНСИРОВАНИЕ РАБОТЫ

Res., 122 (1), 86 (1990).

Исследование выполнено при финансовой

16.

K. D. Walsh and T. A. Kato, Methods Mol. Biol. 2519,

поддержке Российского научного фонда (грант

65 (2023). DOI: 10.1007/978-1-0716-2433-3_7

№

23-24-00383, https://rscf.ru/project/23-24-

17.

B. B. Gomes, S. B.Barros, E. R. Andrade-Wartha,

00383).

et al., J. Sci. Food Agriculture, 89, 2003 (2009). DOI

10.1002/jsfa.3681

18.

L. F. Sciuti, L. H. Z.Cocca, A. R. L. Caires, et al.,

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Chem. Phys. Lett.,

706,

652

(2018). DOI:

Автор настоящей статьи заявляет, что не имеет

10.1016/j.cplett.2018.07.016

конфликта интересов касательно материалов,

19.

A. G. Favinha, D. S. Barreiro, J. N. Martins, et al.,

представленных в работе.

Spectrochim. Acta. Part A - Mol. Biomol. Spectrosco-

БИОФИЗИКА том 68

№ 4

2023

666

РОМОДИН

py,

241,

118644

(2020). DOI:

10.1016/j.saa.

27. N. C. Andrews, Cell Metabolism, 5 (1), (2007). DOI:

2020.118644

10.1016/j.cmet.2006.12.004

20. К. Р. Григорян и А. А. Шиладжян, Биоорганич. хи-

28. M. Sakiyama, H. Matsuo, Y. Toyoda, et al., Human

мия,

(3),

257

(2017).

DOI:

10.7868/

Cell, 34 (4), 1082 (2021). DOI: 10.1007/s13577-021-

S0132342317020038

00534-y

29. F. Sun, Z. Zhao, M. M. Willoughby, et al., Nature, 610

21. Г. Б. Постникова и Е. А. Шеховцова, Биохимия, 83

(7933), 768 (2022). DOI: 10.1038/s41586-022-05347-z

(2), 269 (2018). DOI: 10.1134/S0006297918020098

30. M. Hayes and M. G. Ferruzzi, Nutrition Res., 81, 19

22. Y. Yao, B. Zhang, H. Pang, et al., Food Chem., 398,

(2020). DOI: 10.1016/j.nutres.2020.06.010

133875 (2023). DOI: 10.1016/j.foodchem.2022.133875

31. U. Kutay and M. W. Hetzer, Curr. Opin. Cell Biol., 20

23. A. M. A. al Alamein, H. M. Elwy, and S. H. S. El-Din,

(6), 669 (2008). DOI: 10.1016/j.ceb.2008.09.010

Spectrochim. Acta. Part A - Mol. Biomol. Spectrosco-

32. V. Archambault, J. Li, V. Emond-Fraser, and

py, 206, 37 (2019). DOI: 10.1016/j.saa.2018.07.073

M. Larouche, Front. Cell Devel. Biol., 10, 1012768

24. М. Б. Березин и О. И. Койфман, Рос. химич. журн.,

(2022). DOI: 10.3389/fcell.2022.1012768

61 (4), 42 (2017).

33. S. Y. van der Zanden, M. L. M. Jongsma, A. C. M. Nee-

25. M. Shayeghi, G. O. Latunde-Dada, J. S. Oakhill, et al.,

fjes, et al., Trends Cell Biol., 33, 18 (2022). DOI:

Cell,

122

(5),

789

(2005). DOI:

10.1016/j.cell.

10.1016/j.tcb.2022.06.002

2005.06.025

34. J. Bergonie and L. Tribondeau, Comptes Rendus Heb-

26. A. Qiu, M. Jansen, A. Sakaris, et al., Cell, 127 (5), 917

domadaires des Seances de l'Academie des Science.

(2006). DOI: 10.1016/j.cell.2006.09.041

143, 983 (1906).

Spectrophotometric Determination

of Sodium-Copper Chlorophyllin Level in Lymphocytes

L.A. Romodin*^, **

*State Scientific Center of the Russian Federation - A.I. Burnazyan Federal Medical Biophysical Center of the Federal Medical

Biological Agency of Russia, ul. Marshala Novikova 23, Moscow, 123098 Russia

**Russian Biotechnological University (ROSBIOTECH), Volokolamskoe shosse 11, Moscow, 125080 Russia

This study raises the question of whether it is possible to determine the appearance of sodium-copper chlo-

rophyllin in lymphocytes. To answer this question, the content of chlorophyllin was determined in lympho-

cyte lysate previously incubated in a medium containing 300 μM of copper chlorophyllin. Significant

amounts of chlorophyllin were observed in the lysate, thus, suggesting that chlorophyllin is able to enter cells.

However, the question remains as to whether chlorophyllin can pass through the nuclear membrane.

Based on our own data and information obtained from the scientific literature, it can be concluded that the

passage of chlorophyllin through the nuclear membrane happens at a much slower rate than through the plas-

malemma.

Keywords: lymphocytes, chlorophyllin, radioprotectors, spectrophotometry, transmembrane transport

БИОФИЗИКА том 68

№ 4

2023