БИОХИМИЯ, 2023, том 88, вып. 7, с. 1162 - 1172

УДК 577.151.45

МЕТИОНИНОВАЯ ЗАВИСИМОСТЬ РАКОВЫХ КЛЕТОК -

МИШЕНЬ МЕТИОНИНАЗЫ

Обзор

¹ Национальный медицинский исследовательский онкологический центр им. Н.Н. Блохина

Министерства здравоохранения Российской Федерации,

115478 Москва, Россия; электронная почта: v.pokrovsky@ronc.ru

² Научно-исследовательский институт молекулярной и клеточной медицины

Российского университета дружбы народов (РУДН),

117198 Москва, Россия; электронная почта: louay.ko@gmail.com

³Научно-технологический университет «Сириус», отдел биотехнологии, 354340 Сочи, Россия

⁴ AntiCancer Inc., 92111 Сан-Диего, Калифорния, США; электронная почта: all@anticancer.com

⁵ Калифорнийский университет, отделение хирургии,

92037-7400 Сан-Диего, Ла-Хойя, Калифорния, США

Поступила в редакцию 11.02.2023

После доработки 12.03.2023

Принята к публикации 13.03.2023

Все типы раковых клеток отличаются метиониновой зависимостью, известной как эффект Хофф-

мана. Ограничение поступления метионина (L-Met) подавляет рост и пролиферацию раковых

клеток, между тем как нормальные клетки от дефицита L-Met не страдают. Метиониновая зави-

симость является мишенью метиониназы (METase), которая показала свою эффективность и без-

опасность на всех изученных типах опухолевых моделей in vitro и in vivo, как в монотерапии, так и

в комбинации с другими противоопухолевыми препаратами. Примерно 6 лет назад была получена

METase, которая может применяться перорально как добавка к пище, улучшая результаты лече-

ния некоторых пациентов с распространёнными опухолями. К настоящему моменту METase была

изучена в 8 клинических исследованиях, включая 2 в 1990-х гг. и 6 - в более позднее время. Этот

обзор посвящён клиническим исследованиям ограничения поступления L-Met в опухолевые клет-

ки при помощи METase, в частности, при помощи пероральной лекарственной формы METase

или в комбинации с другими препаратами в лечении пациентов с прогрессирующим раком.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: метиониновая зависимость, метионин-γ-лиаза, пероральная METase, эффект

Хоффмана, клиническое исследование, ограничение метионина, разрушающий метионин фермент.

DOI: 10.31857/S0320972523070072, EDN: FXHDNJ

ВВЕДЕНИЕ

аминокислот [1]. 50 лет назад была обнаружена

зависимость опухолевых клеток от L-Met [2],

Более чем 60 лет исследований метабо-

которая получила название «эффекта Хофф-

лизма раковых клеток показали, что отсут-

мана» [3]. Зависимость от L-Met обусловлена

ствие определённых аминокислот подавляет

повышенной потребностью в этой аминокис-

рост и пролиферацию раковых клеток гораздо

лоте опухолевых клеток, которые расходуют её

более выраженно, чем для нормальных кле-

на реакции трансметилирования [2, 4-8].

ток [1]. Sugimura et al. впервые показали, что

Ограничение поступления L-Met может

удаление аминокислоты метионина (L-Met) из

быть эффективной стратегией в лечении опу-

диеты крыс с опухолями уменьшает рост опу-

холей, зависимых от L-Met для роста и выжи-

холи более выраженно, чем удаление других вания, между тем как на нормальные клетки

Принятые сокращения: CEA - карциноэмбриональный антиген; L-Hcy - L-гомоцистеин; L-Met - метионин;

METase - метиониназа; o-rMETase - пероральная rMETase; PSA - простат-специфичный антиген; rMETase - рекомби-

нантная METase; SAM - аденозилметионин.

* Адресат для корреспонденции.

1162

МЕТИОНИНОВАЯ ЗАВИСИМОСТЬ РАКОВЫХ КЛЕТОК

1163

ограничение L-Met в присутствии L-гомоци-

ния и является основным донором метильных

стеина (L-Hcy) выраженного цитотоксическо-

групп для метилирования ДНК, РНК и хро-

го действия не оказывает [2, 4, 9, 10]. В не-

матина [3, 9, 22]. SAM впоследствии превра-

скольких исследованиях in vivo использовалась

щается в S-аденозилгомоцистеин (SAH) через

ограничивающая L-Met диета и сообщалось об

серию реакций трансметилирования. SAH за-

ингибировании роста опухоли и возрастающей

тем при помощи аденозилгомоцистеиназы рас-

продолжительности жизни животных [11, 12].

падается на гомоцистеин, который может за-

Вегетарианская диета, которая может умень-

тем реметилироваться с получением L-Met

шить поступление L-Met, может быть эффек-

метионинсинтазой (MS; EC 2.1.1.13) в присут-

тивной стратегией, предотвращающей рост

ствии N₅-метилтетрагидрофолата (N₅-MTHF)

опухолей у человека [11, 12], но при этом сни-

и кобаламина как кофактора полного метио-

жение уровня L-Met в организме может быть

нинового цикла [3].

недостаточным. Другой эффективной страте-

В нормальных условиях MS реметилирует

гией, препятствующей опухолевому росту, мо-

приблизительно 50% L-Hcy с образованием

жет быть использование метиониназы (METase),

L-Met во всех тканях. Активность MS необ-

которая уменьшает концентрацию L-Met в кро-

ходима не только для реметилирования L-Hcy,

вотоке [13]. Ограничение поступления L-Met

но также и для поддержания клеточных уров-

с пищей в сочетании с химиотерапией было

ней восстановленного тетрагидрофолата, ко-

впервые использовано почти 40 лет назад [14].

торый необходим для одноуглеродного мета-

Современные исследования делают акцент на

болизма в клетках [3, 23]. L-Hcy может также

применении METase в сочетании с другими

быть реметилирован с использованием бе-

химиотерапевтическими агентами [15-20].

таина, который образуется из холина бетаин-

Настоящий обзор посвящён эффектив-

гомоцистеин-S-метилтрансферазой (BHMT;

ности METase, в частности, её пероральной

EC 2.1.1.5), которая экспрессируется преиму-

лекарственной формы, в качестве самостоя-

щественно в печени и почках и не зависит от

тельного средства или в комбинации с химио-

присутствия фолатов [3].

терапевтическими агентами при лечении па-

Альтернативно, цистатион-бета-синтаза

циентов с поздней стадией злокачественных

(EC 4.2.1.22) может преобразовывать L-Hcy в

новообразований, включая гормон-независи-

пути транссульфурации, где L-Hcy превраща-

мый рак простаты, рак яичников, рак подже-

ется в цистатион, который затем под действи-

лудочной железы, рак прямой кишки и инва-

ем цистатионазы (EC 4.4.1.1) превращается в

зивный дольковый рак молочной железы.

цистеин, использующийся в синтезе глутатио-

на и поддержании окислительно-восстанови-

тельного баланса [3].

МЕТАБОЛИЗМ L-Met

Низкий уровень L-Met - причина падения

уровня SAM, который имеет следующие эф-

L-Met - серосодержащая аминокислота,

фекты: (1) ингибирование ферментов BHMT

необходимая для жизнедеятельности и роста

и MTHFR и предотвращение активации ци-

клеток. Метаболизм L-Met можно разделить на

статион-бета-синтазы для поддержания цикла

три различных пути: (1) цикл L-Met, который

L-Met [3]; (2) накопление 5-MTHF, который

продуцирует аденозилметионин (SAM) [21];

ингибирует глицин-N-метилтрансферазу и

(2) путь восстановления L-Met, который пе-

переключает потребление SAM на ДНК-ме-

рерабатывает L-Met из побочных продуктов

тилтрансферазы [3]; и (3) преимущественное

(S-метил-5′-тиоаденозина) пути синтеза поли-

усиление экспрессии гена MAT, что говорит о

аминов [3]; и (3) путь транссульфурации, кото-

том, что контроль за образованием SAM осу-

рый продуцирует антиоксидант глутатион (ри-

ществляется для поддержания его постоянных

сунок) [3]. Кроме того, поскольку метаболизм

клеточных уровней [3].

фолатов и цикл L-Met тесно связаны, они оба

Восстановительные пути также восстанав-

могут косвенно влиять на биосинтез нуклео-

ливают L-Met, который необходим для синте-

тидов. Фолаты необходимы для синтеза L-Met

за полиаминов [3]. SAM декарбоксилируется и

(рисунок), и неудивительно, что раковые забо-

утилизируется в синтезе полиаминов [3]. Мно-

левания зависимы от фолиевой кислоты [10].

жественные ферментативные шаги требуются

На первом этапе метаболизма L-Met ме-

для преобразования метилтиоаденозина в ме-

тионинаденозилтрансфераза (MAT; EC 2.5.1.6)

тилтиорибозу и, в конечном счёте, в метилтио-

в присутствии ATP катализирует образование

оксобутират (MTOB).

SAM из L-Met, который используется как ко-

Таким образом, биосинтез SAM контроли-

фактор в большинстве реакций метилирова-

рует сохранение клеточных концентраций SAM.

БИОХИМИЯ том 88 вып. 7 2023

1164

ПОКРОВСКИЙ и др.

Обзор метаболизма L-Met: SAM, S-аденозилметионин; MAT, метионинаденозилтрансфераза; SAH, S-аденозилгомо-

цистеин; AHCY, аденозилгомоцистеиназа; MS, метионинсинтаза; BHMT, бетаин-гомоцистеин-S-метилтрансфераза;

dcSAM, декарбоксилат SAM; MTA, метилтиоаденозин; DMG, диметилглицин; 5-MTHF, 5-метилтетрагидрофолат;

и THF, тетрагидрофолат

Эти скоординированные взаимодействия по-

тем не менее раковые клетки имеют повы-

зволяют клеткам поддерживать синтез белков

шенную потребность в её работе, поскольку

и полиаминов и другие реакции метилирова-

используют чрезмерное количество L-Met для

ния для клеточного роста и выживания при

реакций трансметилирования и, таким обра-

диете с низким уровнем L-Met.

зом, могут быть более уязвимы к дефициту

L-Met [5, 27-28].

На сегодняшний день все изученные ли-

УЯЗВИМЫЕ МЕСТА

нии нормальных клеток показали отсутствие

МЕТАБОЛИЗМА ОПУХОЛИ:

метиониновой зависимости и растут почти так

МЕТИОНИНОВАЯ ЗАВИСИМОСТЬ

же хорошо в среде Met^- Hcy⁺, как и в среде Met⁺

Hcy^-, несмотря на активный синтез L-Met из

Метиониновая зависимость является по-

L-Hcy в раковых клетках [24, 25]. Из 23 иссле-

всеместной и фундаментальной отличитель-

дованных клеточных линий различных типов

ной чертой раковых клеток [24, 25]. Метиони-

злокачественных опухолей человека 11 вообще

новая зависимость была впервые описана как

не растут в среде Met^- Hcy⁺, таким образом, их

неспособность опухолевых клеток выживать и

можно считать полностью L-Met-зависимы-

расти при замене L-Met в культуральной среде

ми, и три клеточные линии дают в ней мини-

на его предшественник L-Hcy [2, 8, 26-27].

мальный рост [24]. Впоследствии, используя

В нормальных и некоторых опухолевых

чувствительность к METase как показатель

клетках активны естественные пути ресинтеза

метиониновой зависимости, все тестируемые

L-Met из L-Hcy с помощью метионинсинтазы,

раковые клеточные линии были идентифици-

БИОХИМИЯ том 88 вып. 7 2023

МЕТИОНИНОВАЯ ЗАВИСИМОСТЬ РАКОВЫХ КЛЕТОК

1165

рованы как зависимые от L-Met [25]. Согласно

ских больных. Ферменты, снижающие уровень

этим результатам, метиониновая зависимость

L-Met, в монотерапии или в комбинации с

часто наблюдается у многих видов опухоле-

диетой с низким содержанием L-Met и химио-

вых клеток человека, и предполагается, что это

терапевтическими препаратами имеют потен-

может быть важным фактором в онкогенной

циал как новая парадигма в лечении рака [32].

трансформации и терапевтической мишенью.

Метионин-γ-лиаза (methioninase; EC 4.4.1.11,

Позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ)

метиониназа, METase) является бактериаль-

с [¹¹С]L-Met показала яркий сигнал и была

ным пиридоксаль-5′-фосфат-зависимым фер-

более специфичной для обнаружения опухо-

ментом, она катализирует гамма-элиминацию

левых клеток, чем изображения, полученные

L-Met с образованием альфа-кетомасляной

с [¹⁸F]дезоксиглюкозой, представляя дополни-

кислоты, метилмеркаптана и аммиака [33-35].

тельные доказательства того, что метиони-

Впервые METase была использована для лече-

новая зависимость характерна для всех типов

ния рака в 1973 г. Kreis et al., когда на модели

раковых клеток [29]. Эти данные позволяют

карциномы крыс Уокера-256 было показано

предположить, что различия потребности в

ингибирование роста опухоли ферментом, вы-

L-Met между раковыми и нормальными клет-

деленным из Clostridium sporogenes [36]. Этот

ками могут быть более выраженными, чем раз-

фермент подавлял рост опухоли более эффек-

личия потребности в глюкозе.

тивно, чем рацион без L-Met, и не вызывал

Метиониновая зависимость раковых кле-

потерю массы тела [36]. Однократное внутри-

ток обусловлена избыточной активацией ре-

венное введение METase истощало уровень

акций трансметилирования, которая, вероят-

L-Met в плазме крови до 8% от контроль-

но, является причиной гиперметилирования

ного уровня [36]. Ген METase был клониро-

ДНК [22, 30], приводящего к анеуплоидии в

ван из Pseudomonas putida и экспрессирован в

опухолевых клетках [22, 30], или же гипер-

E. coli [13], и было показано, что он эффекти-

метилированием лизиновых меток гисто-

вен против всех типов рака in vitro и in vivo [37-

на Н3 [27, 28].

49]. Пегилированная рекомбинантная METase

В среде Met^- Hcy⁺ ингибирование роста

(rMETase) была использована in vivo для уве-

L-Met-зависимых раковых клеток приводит

личения периода полувыведения и минимиза-

к уменьшению доли делящихся клеток в по-

ции иммунологических реакций [50].

пуляции, в отличие от накопления клеток в

Единственным побочным эффектом внут-

фазе G₁ в культуре нормальных фибробластов

ривенного введения пегилированной rMETase

при высокой плотности в среде с добавлением

у обезьян была непродолжительная ане-

L-Met [31]. Ограничение L-Met останавливает

мия [50]. После внутривенной инъекции ко-

раковые клетки в фазе S/G₂ клеточного цикла

фактор rMETase пиридоксаль-5′-фосфат (PLP)

и приводит к гибели клоногенных клеток, ко-

быстро диссоциировал, что привело к сниже-

торые эквивалентны инициирующим опухоль

нию активности фермента

[50]. Наблюдав-

клеткам, и делает раковые клетки чувствитель-

шиеся проблемы анафилаксии и диссоциации

ными к препаратам, специфически действую-

PLP rMETase были решены при помощи пер-

щим на клеточный цикл [28, 31].

оральной доставки rMETase (o-rMETase): при

пероральном применении rMETase действует

в желудочно-кишечном тракте без попадания

ОГРАНИЧЕНИЕ ПОСТУПЛЕНИЯ L-Met

в кровь. В моделях ортотопических ксено-

трансплантатов (PDOX) у мышей o-rMETase

Из-за окислительного стресса и гиперпро-

продемонстрировала исключительную эффек-

лиферации, вызванной онкогенным перепро-

тивность против рефрактерной саркомы, рака

граммированием, раковые клетки имеют вы-

поджелудочной железы, рака толстой кишки

сокую потребность в L-Met. Когда происходит

и меланомы [40-43, 45].

такое увеличение потребности в L-Met одно-

временно с ограничением его доступности,

в результате окислительного стресса и отсут-

КЛИНИЧЕСКИЕ НАБЛЮДЕНИЯ

ствия предшественников нуклеотидов проявля-

ется метаболическая уязвимость, называемая

Ранние клинические испытания рацио-

метиониновой зависимостью, которая являет-

нов питания с ограничением L-Met с химио-

ся отличительной чертой раковых клеток. Ис-

терапией и без неё показали многообещающие

пользование метиониновой зависимости при

результаты у некоторых пациентов с поздней

диете с низким содержанием L-Met показало

стадией рака. С 1990-х гг. были проведены

многообещающие результаты у онкологиче-

пилотные клинические испытания первой

БИОХИМИЯ том 88 вып. 7 2023

166

ПОКРОВСКИЙ и др.

Резюме клинических исследований METase

Комбинация

Заболевание

Тип

Количество

Дозы и режимы

с другими химио-

Развитие

Авторы

(состояние)

METase

пациентов

применения

терапевтическими

заболевания

препаратами

От 5000

до 20 000 единиц

Прогрессирующий

нереком-

Tan et al.

путём внутри-

рак молочной

бинантная

(1996)

венной инфузии

железы

METase

[51]

в течение 4 или 10 ч

однократно

Рак лёгких,

От 5000 до 20 000

молочной железы,

единиц в течение

Tan et al.

лимфома

rMETase

6-24 ч путём внут-

(1997)

и рак почки

ривенной инфузии

[34]

на поздних стадиях

однократно

500 единиц

o-rMETase

ежедневно, раз-

делённые на две

Прогрессирующий

один пациент:

уровень PSA

пероральные дозы

Han

рак яичников

пероральный приём

снизился,

по 250 единиц

et al.

и рак

o-rMETase

дексаметазона

уровень

в течение 1 мес.

(2020)

предстательной

и диета с низким

гемоглобина

для пациента

[20]

железы

содержанием L-Met

повысился

с раком яичников

или 3 мес.

для пациента

с раком простаты

500 единиц

o-rMETase

Han

Прогрессирующий

ежедневно,

один пациент:

уровень PSA

et al.

рак предстательной

o-rMETase

разделённые на две

диета с низким

снизился

(2021)

железы

пероральные дозы

содержанием L-Met

[19]

по 250 единиц

в течение 1 мес.

500 единиц

o-rMETase

Han

Прогрессирующий

ежедневно,

уровень PSA

et al.

рак предстательной

o-rMETase

разделённые на две

стабилен

(2021)

железы

пероральные дозы

[18]

по 250 единиц

уровень

500 единиц

CA19-9

o-rMETase

снизился;

Kubota

IV стадия рака

ежедневно,

FOLFIRINOX

объём опухоли

et al.

поджелудочной

o-rMETase

разделённые на две

или FOLFIRI

не изменился

(2022)

железы

пероральные дозы

каждые две недели

при компью-

[16]

по 250 единиц

терной

в течение 19 мес.

томографии

500 единиц

уровень CEA

o-rMETase

снизился;

Kubota

ежедневно,

объём опухоли

диета с низким

et al.

Рак прямой кишки

o-rMETase

разделённые на две

не изменился

содержанием L-Met

(2022)

пероральные дозы

при компью-

[15]

по 250 единиц

терной

в течение 18 мес.

томографии

диета с низким

уровень СЕА

содержанием L-Met,

снизился;

доксорубицин

Инвазивная

250 единиц

объём опухоли

Kubota

и циклофосфамид

дольковая

o-rMETase

не изменился

et al.

o-rMETase

в течение первых

карцинома

ежедневно каждые

при компью-

(2022)

3 мес., затем

молочных желез

6 ч в течение 6 мес.

терной томо-

[17]

доцетаксел

графии

в течение

и METPET

следующих 3 мес.

БИОХИМИЯ том 88 вып. 7

2023

МЕТИОНИНОВАЯ ЗАВИСИМОСТЬ РАКОВЫХ КЛЕТОК

1167

фазы для оценки цитотоксичности, фармако-

В ранних клинических исследованиях,

кинетики, истощения L-Met и определения

проведённых Han et al. [18-20], уровень цир-

максимальной переносимой дозы METase,

кулирующего L-Met у 67-летней женщины с

rMETase

[34,

51] и недавно появившейся

поздней стадией рака яичников снизился на

o-rMETase [15-20].

50% в течение 4 ч после приёма 250 единиц

Пробное клиническое испытание первой

o-rMETase. Четырём взрослым пациентам с

фазы с использованием нерекомбинантной

прогрессирующим раком простаты было на-

METase P. putida показало отсутствие острой

значено 500 единиц o-rMETase ежедневно, раз-

клинической токсичности или побочных эф-

делённых на 2 пероральные дозы по 250 еди-

фектов после воздействия METase [51] в дозе

ниц с разной продолжительностью введения.

менее 20 000 единиц при внутривенной инфу-

У пациента 1 уровень простат-специфичного

зии в течение 10 ч. У пациента 1 (5000 единиц)

антигена (PSA) снизился на 70% с 2000 нг/мл в

и пациента 2 (10 000 единиц) с распростра-

начале терапии до примерно 600 нг/мл в тече-

нённым раком молочной железы истощение

ние трёх месяцев приёма o-rMETase и декса-

L-Met началось через 30 мин после начала

метазона перорально (таблица), оба препарата

инфузии и продолжалось 4 ч после её заверше-

внесли вклад в снижение уровня PSA. За 4 нед.

ния. Значительное снижение уровня L-Met в

приёма o-rMETase у пациентов 2 и 3 произо-

сыворотке крови составило 19%, 35% и 50% в

шло снижение уровня PSA на 38% и 20% соот-

конце терапии у пациента 1, пациента 2 и па-

ветственно, затем его уровень стабилизировал-

циента 3 (20 000 единиц в течение 10 ч внутри-

ся. Пациент 2 придерживался вегетарианской

венной инфузии) соответственно [51]. Резуль-

диеты с низким содержанием L-Met, что мог-

тат исследований показал наличие корреляции

ло повлиять на уровни L-Met и PSA. Уровень

снижения L-Met c дозой rMETase и временем

L-Met у этого пациента снизился на 42,7% в

инфузии.

течение 12 дней с использованием o-rMETase.

В другом клиническом исследовании пер-

За 6 недель до начала терапии у пациента 4

вой фазы была использована rMETase, кото-

резко вырос уровень PSA с 38 до 56 нг/мл, но

рая была клонирована из P. putida и экспрес-

к 15 неделе после начала приёма o-rMETase

сирована в E. coli, для истощения пула L-Met

его уровень стабилизировался на 62 нг/мл. Не

в сыворотке крови пациентов с раком. Девять

наблюдалось клинической токсичности и дру-

пациентов с поздней стадией рака лёгких, мо-

гих побочных эффектов ни у одного из пациен-

лочных желез, лимфомы и рака почки полу-

тов с прогрессирующим раком предстательной

чали однократную внутривенную инфузию

железы после лечения o-rMETase отдельно или

rMETase в дозах от 5000 до 20 000 единиц в

в комбинации с диетой с низким содержанием

течение 6-24 ч (таблица). Клинической ток-

L-Met. Эти результаты позволяют предполо-

сичности не наблюдалось ни у одного пациен-

жить, что диета с низким содержанием L-Met,

та после лечения rMETase. Истощение L-Меt

а также изменение дозы o-rMETase может

началось в течение первого часа после начала

помочь снизить уровни L-Met и PSA в крови,

инфузии rMETase и достигало максимума че-

тем самым предотвращая прогрессию рака

рез 2 ч. Низкая концентрация L-Met сохраня-

простаты.

лась в течение всей инфузии и 2 ч с момента

Согласно статистике, лишь у около 5% па-

её окончания. L-Met у пациентов снижался до

циентов с IV стадией рака поджелудочной же-

всего 0,1 мкM в течение 2 ч, что сопоставимо

лезы, принимавших FOLFIRINOX, происхо-

с 300-кратным истощением без признаков ток-

дила стабилизация заболевания в течение

сичности [34]. Однако авторы не оценивали

18 мес. с момента постановки диагноза [16].

противоопухолевую активность этого лечения.

В клиническом исследовании ограничение

Согласно этим результатам, rMETase безопас-

L-Met при помощи o-rMETase, принимаемой

на при внутривенном введении и эффективно

2 раза в день как добавка к пище, и диеты с

истощает свою биохимическую мишень

низким содержанием L-Met показало очевид-

L-Met сыворотки крови.

но взаимоусиливающий эффект в комбинации

Восемь пациентов с различными солидны-

с FOLFIRINOX или FOLFIRI каждые 2 недели.

ми опухолями, включая гормон-независимый

Для мониторинга прогрессирования заболева-

рак простаты, рак яичников, рак поджелудоч-

ния использовался уровень ракового антиге-

ной железы, рак прямой кишки и инвазивный

на 19-9 (CA19-9) в крови и компьютерная томо-

дольковый рак молочной железы, получали

графия (таблица). У пациента с поздней стадией

o-rMETase в качестве отдельной добавки или

рака поджелудочной железы заболевание ста-

в комбинации с химиотерапевтическими аген-

билизировалось, и он оставался живым через

тами [15-20].

19 мес. после постановки диагноза [16].

БИОХИМИЯ том 88 вып. 7 2023

168

ПОКРОВСКИЙ и др.

Другое клиническое исследование осущест-

в лечении пациентов с различными видами

влялось с участием пациентов с раком прямой

злокачественных новообразований. Благодаря

кишки, в нём уровень L-Met снижали с помо-

отсутствию у o-rMETase поздних побочных эф-

щью o-rMETase и диеты с низким содержанием

фектов и токсичности она становится идеаль-

L-Met. Уровень карциноэмбрионального анти-

ным агентом для стратегии комбинированной

гена (CEA) был стабилен в течение 18 мес. после

терапии поздних стадий рака. С наступлением

начала терапии. Пациенты регулярно прохо-

эры o-rMETase иммуногенные осложнения,

дили ректороманоскопию, при которой изме-

связанные со способом введения нативных

рялся размер опухоли (таблица). Согласно этим

форм фермента (внутривенные инъекции) и

результатам, o-rMETase в качестве добавки к

необходимостью частого введения, судя по

пище и диета с низким содержанием L-Met мо-

всему, были устранены. Новые технологии сде-

гут быть эффективны при раке толстой кишки с

лали возможным проведение обширных фар-

долгосрочной стабилизацией заболевания [15].

макокинетических и фармакодинамических

Ограничение L-Met при помощи o-rMETase

исследований o-rMETase, что даёт возмож-

каждые 6 ч в течение 6 мес. и диета с низким со-

ность разработать более эффективный режим

держанием L-Met показали взаимоусиливаю-

дозирования препарата для клинического

щий эффект в комбинации с доксорубицином

применения. Наилучшие результаты, по-ви-

и циклофосфамидом, которые применялись

димому, достигаются посредством фармако-

первые 3 мес., затем с доцетакселом в течение

логически направленной и индивидуальной

последующих 3 мес., что привело к полному

терапевтической стратегии. Можно надеяться

ответу, который ожидается менее чем у 10%

на скорую разработку деталей такой стратегии,

пациентов с инвазивной дольковой карцино-

что даст возможность полностью реализовать

мой молочных желез, получающих только нео-

потенциал rMETase в клинической практике.

адъювантную химиотерапию. Уровень СЕА в

Наконец, выявление L-Met-зависимых био-

крови и компьютерная томография использо-

маркеров опухолей, таких как важные эпигене-

вались для отслеживания развития заболева-

тические признаки, и более глубокое понима-

ния, а полный ответ был продемонстрирован с

ние клеточного ответа на ограничение L-Met

помощью METPET через 6 мес., когда терапия

в опухолевых клетках могут дать более эффек-

была завершена (таблица) [17].

тивные методы борьбы с раком за счёт его уни-

Ни в одном клиническом исследовании не

кальной метаболической уязвимости.

было выявлено выраженной токсичности или

побочных эффектов после длительного перио-

Вклад авторов. Вадим С. Покровский, Луай

да лечения с o-rMETase в виде добавки в дозе

Або Кура и Елена А. Демидова - сбор и анализ

500 единиц в день, разделённой на две пер-

информации, написание и редактирование ру-

оральные дозы по 250 единиц. Эти результа-

кописи, создание иллюстраций; Цинхун Хань и

ты предполагают, что использование METase

Роберт М. Хоффман - редактирование рукопи-

может быть безопасной и эффективной стра-

си. Все авторы одобрили окончательный вариант

тегией снижения уровней циркулирующего и

рукописи до её представления к публикации.

внутриклеточного L-Met без изменения дие-

Финансирование. Данное исследование

ты, тем самым ускоряя клиническое примене-

поддержано государственной программой Ми-

ние ограничения L-Met.

нистерства образования и науки, госзадание

№ 075-01551-23-00 (ФССП-2023-0006).

Конфликт интересов. Авторы заявляют об

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

отсутствии конфликта интересов.

Соблюдение этических норм. Данная статья

Из описанного выше можно сделать вывод,

не содержит исследований с участием людей или

что o-rMETase является важным дополнением

животных, проведённых кем-либо из авторов.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Sugimura, T., Birnbaum, S. M., Winitz, M.,

chem. Biophys., 81, 448-455, doi: 10.1016/0003-9861

and Greenstein, J. P.

(1959) Quantitative nutri-

(59)90225-5.

tional studies with water-soluble, chemically de-

2. Hoffman, R. M., and Erbe, R. W. (1976) High in vivo

fined diets. VIII. The forced feeding of diets each

rates of methionine biosynthesis in transformed

lacking in one essential amino acid, Arch. Bio-

human and malignant rat cells auxotrophic for me-

БИОХИМИЯ том 88 вып. 7 2023

МЕТИОНИНОВАЯ ЗАВИСИМОСТЬ РАКОВЫХ КЛЕТОК

1169

thionine, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 73, 1523-1527,

for human cancer cells based on a metabolic defect,

doi: 10.1073/pnas.73.5.1523.

J. Natl. Cancer Inst., 76, 629-639, doi: 10.1093/

Kaiser, P. (2020) Methionine dependence of cancer,

jnci/76.4.629.

Biomolecules, 10, 568, doi: 10.3390/biom10040568.

15.

Kubota, Y., Han, Q., Hamada, K., Aoki, Y., Masaki, N.,

Coalson, D. W., Mecham, J. O., Stern, P. H., and

Obara, K., Tsunoda, T., and Hoffman, R. M. (2022)

Hoffman, R. M. (1982) Reduced availability of en-

Long-term stable disease in a rectal-cancer pa-

dogenously synthesized methionine for S-adenosyl-

tient treated by methionine restriction with oral re-

methionine formation in methionine-dependent can-

combinant methioninase and a low-methionine

cer cells, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 4248-4251,

diet, Anticancer Res., 42, 3857-3861, doi: 10.21873/

doi: 10.1073/pnas.79.14.4248.

anticanres.15877.

Stern, P. H., and Hoffman, R. M. (1984) Elevat-

16.

Kubota, Y., Han, Q., Hozumi, C., Masaki, N.,

ed overall rates of transmethylation in cell lines

Yamamoto, J., Aoki, Y., Tsunoda, T., and Hoffman,

from diverse human tumors, In Vitro, 20, 663-670,

R. M. (2022) Stage IV pancreatic cancer patient

doi: 10.1007/BF02619617.

treated with FOLFIRINOX combined with oral

Stern, P. H., Mecham, J. O., Wallace, C. D., and

methioninase: a highly-rare case with long-term stable

Hoffman, R. M. (1983) Reduced free-methionine in

disease, Anticancer Res., 42, 2567-2572, doi: 10.21873/

methionine-dependent SV40-transformed human fi-

anticanres.15734.

broblasts synthesizing apparently normal amounts of

17.

Kubota, Y., Han, Q., Masaki, N., Hozumi, C.,

methionine, J. Cell. Physiol., 117, 9-14, doi: 10.1002/

Hamada, K., Aoki, Y., Obara, K., Tsunoda, T., and

jcp.1041170103.

Hoffman, R. M.

(2022) Elimination of axillary-

Singhal, T., Narayanan, T. K., Jacobs, M. P., Bal, C.,

lymph-node metastases in a patient with invasive

and Mantil, J. C. (2012) ¹¹C-methionine PET for grad-

lobular breast cancer treated by first-line neo-adjuvant

ing and prognostication in gliomas: a comparison

chemotherapy combined with methionine restriction,

study with ¹⁸F-FDG PET and contrast enhancement

Anticancer Res.,

42,

5819-5823, doi:

10.21873/

on MRI, J. Nucl. Med., 53, 1709-1715, doi: 10.2967/

anticanres.16089.

jnumed.111.102533.

18.

Han, Q., and Hoffman, R. M.

(2021) Chronic

Tisdale, M. J. (1980) Effect of methionine deprivation

treatment of an advanced prostate-cancer patient with

on methylation and synthesis of macromolecules,

oral methioninase resulted in long-term stabilization

Br. J. Cancer, 42, 121-128, doi: 10.1038/bjc.1980.210.

of rapidly rising PSA levels, In Vivo, 35, 2171-2176,

Hoffman, R. M. (1984) Altered methionine me-

doi: 10.21873/invivo.12488.

tabolism, DNA methylation and oncogene expres-

19.

Han, Q., and Hoffman, R. M. (2021) Lowering and

sion in carcinogenesis, Biochim. Biophys. Acta BBA

stabilizing PSA levels in advanced-prostate cancer

Rev. Cancer,

738,

49-87, doi:

10.1016/0304-419X

patients with oral methioninase, Anticancer Res., 41,

(84)90019-2.

1921-1926, doi: 10.21873/anticanres.14958.

10.

Hoffman, R. M., Coalson, D. W., Jacobsen, S. J., and

20.

Han, Q., Tan, Y., and Hoffman, R. M. (2020) Oral

Erbe, R. W. (1981) Folate polyglutamate and mono-

dosing of recombinant methioninase is associated

glutamate accumulation in normal and SV40-trans-

with a 70% drop in PSA in a patient with bone-

formed human fibroblasts, J. Cell. Physiol., 109,

metastatic prostate cancer and 50% reduction in

497-505, doi: 10.1002/jcp.1041090316.

circulating methionine in a high-stage ovarian cancer

11.

Epner, D. E., Morrow, S., Wilcox, M., and Houghton,

patient, Anticancer Res., 40, 2813-2819, doi: 10.21873/

J. L. (2002) Nutrient intake and nutritional indexes

anticanres.14254.

in adults with metastatic cancer on a phase I clinical

21.

Cantoni, G. L. (1975) Biological methylation: select-

trial of dietary methionine restriction, Nutr. Cancer,

ed aspects, Annu. Rev. Biochem., 44, 435-451, doi:

42, 158-166, doi: 10.1207/S15327914NC422_2.

10.1146/annurev.bi.44.070175.002251.

12.

Hoshiya, Y., Guo, H., Kubota, T., Inada, T.,

22.

Hoffman, R. M. (2015) Development of recombinant

Asanuma, F., Yamada, Y., Koh, J., Kitajima, M.,

methioninase to target the general cancer-specific

Hoffman, R. M. (1995) Human tumors are methionine

metabolic defect of methionine dependence: a 40-

dependent in vivo, Anticancer Res., 15, 717-718.

year odyssey, Expert Opin. Biol. Ther., 15, 21-31,

13.

Tan, Y., Xu, M., Tan, X., Tan, X., Wang, X.,

doi: 10.1517/14712598.2015.963050.

Saikawa, Y., Nagahama, T., Sun, X., Lenz, M., and

23.

Pokrovsky, V. S., Abo Qoura, L., Morozova, E., and

Hoffman, R. M. (1997) Overexpression and large-

Bunik, V. I. (2022) Predictive markers for efficien-

scale production of recombinant L-methionine-α-

cy of the amino-acid deprivation therapies in can-

deamino-γ-mercaptomethane-lyase for novel anti-

cer, Front. Med., 9, 1035356, doi: 10.3389/fmed.

cancer therapy, Protein Expr. Purif., 9, 233-245, doi:

2022.1035356.

10.1006/prep.1996.0700.

24.

Mecham, J. O., Rowitch, D., Wallace, C. D., Stern,

14.

Stern, P. H., and Hoffman, R. M. (1986) Enhanced

P. H., and Hoffman, R. M. (1983) The metabolic

in vitro selective toxicity of chemotherapeutic agents

defect of methionine dependence occurs frequently

БИОХИМИЯ том 88 вып. 7 2023

1170

ПОКРОВСКИЙ и др.

in human tumor cell lines, Biochem. Biophys. Res.

(1997) Recombinant methioninase infusion reduces

Commun.,

117,

429-434, doi:

10.1016/0006-291X

the biochemical endpoint of serum methionine

(83)91218-4.

with minimal toxicity in high-stage cancer patients,

25.

Tan, Y., Xu, M., and Hoffman, R. M. (2010) Broad

Anticancer Res., 17, 3857-3860.

selective efficacy of recombinant methioninase and

35.

Hoffman, R. M. (2017) Is DNA methylation the new

polyethylene glycol-modified recombinant methi-

guardian of the genome? Mol. Cytogenet., 10, 11,

oninase on cancer cells in vitro, Anticancer Res., 30,

doi: 10.1186/s13039-017-0314-8.

1041-1046.

36.

Kreis, W., and Hession, C. (1973) Biological effects

26.

Yamamoto, J., Han, Q., Inubushi, S., Sugisawa, N.,

of enzymatic deprivation of L-methionine in cell

Hamada, K., Nishino, H., Miyake, K., Kumamoto, T.,

culture and an experimental tumor, Cancer Res.,

Matsuyama, R., Bouvet, M., Endo, I., and Hoffman,

33, 1866-1869.

R. M. (2020) Histone methylation status of H3K4me3

37.

Higuchi, T., Kawaguchi, K., Miyake, K., Han, Q.,

and H3K9me3 under methionine restriction is unstable

Tan, Y., Oshiro, H., Sugisawa, N., Zhang, Z.,

in methionine-addicted cancer cells, but stable in

Razmjooei, S., Yamamoto, N., Hayashi, R., Kimura, H.,

normal cells, Biochem. Biophys. Res. Commun., 533,

Miwa, S., Igarashi, K., Chawla, S. P., Singh, A. S.,

1034-1038, doi: 10.1016/j.bbrc.2020.09.108.

Eilber, F. C., Singh, S. R., Tsuchiya, H., and Hoffman,

27.

Yamamoto, J., Inubushi, S., Han, Q., Tashiro, Y.,

R. M. (2018) Oral recombinant methioninase com-

Sugisawa, N., Hamada, K., Aoki, Y., Miyake, K.,

bined with caffeine and doxorubicin induced regres-

Matsuyama, R., Bouvet, M., Clarke, S. G., Endo, I.,

sion of a doxorubicin-resistant synovial sarcoma in a

and Hoffman, R. M. (2020) The linkage of methi-

PDOX mouse model, Anticancer Res., 38, 5639-5644,

onine addiction, overmethylation of histone H3 ly-

doi: 10.21873/anticanres.12899.

sines and malignancy demonstrated when cancer

38.

Higuchi, T., Oshiro, H., Miyake, K., Sugisawa, N.,

cells revert to methionine-independence, bioRxiv,

Han, Q., Tan, Y., Park, J., Zhang, Z., Razmjooei, S.,

doi: 10.1101/2020.12.04.412437.

Yamamoto, N., Hayashi, K., Kimura, H., Miwa, S.,

28.

Wang, Z., Yip, L. Y., Lee, J. H. J., Wu, Z., Chew,

Igarashi, K., Bouvet, M., Chawla, S. P., Singh, S. R.,

H. Y., Chong, P. K. W., Teo, C. C., Ang, H. Y., Peh,

Tsuchiya, H., and Hoffman, R. M. (2019) Oral re-

K. L. E., Yuan, J., Ma, S., Choo, L. S. K., Basri, N.,

combinant methioninase, combined with oral caffeine

Jiang, X., Yu, Q., Hillmer, A. M., Lim, W. T., Lim,

and injected cisplatinum, overcome cisplatinum-

T. K. H., Takano, A., Tan, E. H., Tan, D. S. W.,

resistance and regresses patient-derived orthotopic

Ho, Y. S., Lim, B., and Tam, W. L. (2019) Methi-

xenograft model of osteosarcoma, Anticancer Res., 39,

onine is a metabolic dependency of tumor-initiating

4653-4657, doi: 10.21873/anticanres.13646.

cells, Nat. Med., 25, 825-837, doi: 10.1038/s41591-

39.

Higuchi, T., Sugisawa, N., Yamamoto, J., Oshiro, H.,

019-0423-5.

Han, Q., Yamamoto, N., Hayashi, K., Kimura, H.,

29.

Kubota, Y., Sato, T., Hozumi, C., Han, Q., Aoki, Y.,

Miwa, S., Igarashi, K., Tan, Y., Kuchipudi, S.,

Masaki, N., Obara, K., Tsunoda, T., and Hoffman,

Bouvet, M., Singh, S. R., Tsuchiya, H., and Hoffman,

R. M. (2023) Superiority of [¹¹C] methionine over

R. M. (2020) The combination of oral-recombinant

[18F] deoxyglucose for PET imaging of multiple cancer

methioninase and azacitidine arrests a chemothera-

types due to the methionine addiction of cancer, Int. J.

py-resistant osteosarcoma patient-derived orthotopic

Mol. Sci., 24, 1935, doi: 10.3390/ijms24031935.

xenograft mouse model, Cancer Chemother. Pharma-

30.

Bloomfield, M., and Duesberg, P. (2016) Inherent

col., 85, 285-291, doi: 10.1007/s00280-019-03986-0.

variability of cancer-specific aneuploidy generates

40.

Kawaguchi, K., Han, Q., Li, S., Tan, Y., Igarashi, K.,

metastases, Mol. Cytogenet.,

90, doi:

10.1186/

Kiyuna, T., Miyake, T., Miyake, M., Chmielowski, B.,

s13039-016-0297-x.

Nelson, S. D., Russell, T. A., Dry, S. A., Li, Y.,

31.

Hoffman, R. M., and Jacobsen, S. J. (1980) Reversible

Singh, A. S., Eckardt, M. A. R., Unno, M., Eilber,

growth arrest in simian virus 40-transformed human

F. C., and Hoffman, R. M.(2018) Targeting me-

fibroblasts, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 7306-7310,

thionine with oral recombinant methioninase

doi: 10.1073/pnas.77.12.7306.

(o-rMETase) arrests a patient-derived orthotopic

32.

Yamamoto, J., Han, Q., Simon, M., Thomas, D., and

xenograft (PDOX) model of BRAF-V600E mutant

Hoffman, R. M. (2022) Methionine restriction: ready

melanoma: implications for chronic clinical cancer

for prime time in the cancer clinic? Anticancer Res.,

therapy and prevention, Cell Cycle, 17, 356-361, doi:

42, 641-644, doi: 10.21873/anticanres.15521.

10.1080/15384101.2017.1405195.

33.

Tanaka, H., Esaki, N., and Soda, K. (1985) A versa-

41.

Kawaguchi, K., Han, Q., Li, S., Tan, Y., Igarashi, K.,

tile bacterial enzyme: l-methionine γ-lyase, Enzyme

Murakami, T., Unno, M., and Hoffman, R. M. (2019)

Microb. Technol., 7, 530-537, doi: 10.1016/0141-0229

Efficacy of recombinant methioninase (rMETase)

(85)90094-8.

on recalcitrant cancer patient-derived orthotopic

34.

Tan, Y., Zavala, J., Han, Q., Xu, M., Sun, X., Tan, X.,

xenograft (PDOX) mouse models: a review, Cells, 8,

Tan, X., Magana, R., Geller, J., and Hoffman, R. M.

410, doi: 10.3390/cells8050410.

БИОХИМИЯ том 88 вып. 7 2023

МЕТИОНИНОВАЯ ЗАВИСИМОСТЬ РАКОВЫХ КЛЕТОК

1171

42.

Kawaguchi, K., Higuchi, T., Li, S., Han, Q., Tan, Y.,

Kotlov, M. I., Belyi, Y. F., Pokrovsky, V. S., and

Igarashi, K., Zhao, M., Miyake, K., Kiyuna, T.,

Demidkina, T. V. (2013) Kinetic Parameters and Cy-

Miyake, M., Ohshiro, H., Sugisawa, N., Zhang, Z.,

totoxic Activity of Recombinant Methionine γ-Lyase

Razmjooei, S., Wangsiricharoen, S., Chmielowski, B.,

from Clostridium tetani, Clostridium sporogenes,

Nelson, S. D., Russell, T. A., Dry, S. M., Li, Y.,

Porphyromonas gingivalis and Citrobacter freundii,

and Hoffman, R. M. (2018) Combination therapy of

Acta Naturae,

92-98, doi:

10.32607/20758251-

tumor-targeting Salmonella typhimurium A1-R and oral

2013-5-3-92-98.

recombinant methioninase regresses a BRAF-V600E-

47.

Morozova, E. A., Anufrieva, N. V., Davydov, D. Zh.,

negative melanoma, Biochem. Biophys. Res. Commun.,

Komarova, M. V., Dyakov, I. N., Rodionov, A. N.,

503, 3086-3092, doi: 10.1016/j.bbrc.2018.08.097.

Demidkina, T. V., and Pokrovsky, V. S. (2017) Plasma

43.

Kawaguchi, K., Miyake, K., Han, Q., Li, S., Tan, S.,

methionine depletion and pharmacokinetic properties

Igarashi, K., Kiyuna, K., Miyake, M., Higuchi, T.,

in mice of methionine γ-lyase from Citrobacter

Oshiro, H., Zhang, Z., Razmjooei, S., Wangsiri-

freundii, Clostridium tetani and Clostridium sporogenes,

charoen, S., Bouvet, M., Singh, S. R., Unno, M., and

Biomed. Pharmacother, 88, 978-984, doi: 10.1016/

Hoffman, R. M. (2018) Oral recombinant methion-

j.biopha.2017.01.127.

inase (o-rMETase) is superior to injectable rMETase

48.

Pokrovsky, V. S., Anisimova, N. Y., Davydov, D. Zh.,

and overcomes acquired gemcitabine resistance in

Bazhenov, S. V., Bulushova, N. V., Zavilgelsky, G. B.,

pancreatic cancer, Cancer Lett., 432, 251-259, doi:

Kotova, V. Y., and Manukhov, I. V. (2019) Methionine

10.1016/j.canlet.2018.06.016.

gamma lyase from Clostridium sporogenes increases

44.

Yoshioka, T., Wada, T., Uchida, N., Maki, H.,

the anticancer effect of doxorubicin in A549 cells

Yoshida, H., Ide, N., Kasai, H., Hojo, K., Shono, K.,

and human cancer xenografts, Invest. New Drugs,

Maekawa, R., Yagi, S., Hoffman, R. M., and Sugita, K.

37, 201-209, doi: 10.1007/s10637-018-0619-4.

(1998) Anticancer efficacy in vivo and in vitro, synergy

49.

Pokrovsky, V. S., Chepikova, O. E., Davydov, D. Zh.,

with

5-fluorouracil, and safety of recombinant

Zamyatnin, A. A., Lukashev, A. N., and Lukasheva,

methioninase, Cancer Res., 58, 2583-2587.

E. V. (2019) Amino acid degrading enzymes and their

45.

Oshiro, H., Tome, Y., Kiyuna, T., Yoon, S. N., Lwin,

application in cancer therapy, Curr. Med. Chem., 26,

T. M., Han, Q., Tan, Y., Miyake, K., Higuchi, T.,

446-464, doi: 10.2174/0929867324666171006132729.

Sugisawa, N., Katsuya, Y., Park, J. H., Zang, Z.,

50.

Yang, Z., Wang, J., Yoshioka, T., Li, B., Lu, Q.,

Razmjooei, S., Bouvet, M., Clary, B., Singh, S. R.,

Li, S., Sun, X., Tan, Y., Yagi, S., Frenkel, E. P.,

Kanaya, F., Nishida, F., and Hoffman, R. M. (2019)

and Hoffman, R. M. (2004) Pharmacokinetics, me-

Oral recombinant methioninase overcomes colorectal-

thionine depletion, and antigenicity of recombinant

cancer liver metastasis resistance to the combination of

methioninase in primates, Clin. Cancer Res., 10, 2131-

5-fluorouracil and oxaliplatinum in a patient-derived

2138, doi: 10.1158/1078-0432.CCR-03-0068.

orthotopic xenograft mouse model, Anticancer Res.,

51.

Tan, Y., Zavala, J., Xu, M., Zavala, J., and Hoffman,

39, 4667-4671, doi: 10.21873/anticanres.13648.

R. M. (1996) Serum methionine depletion without

46.

Morozova, E. A., Kulikova, V. V., Yashin, D. V.,

side effects by methioninase in metastatic breast cancer

Anufrieva, N. V., Anisimova, N. Y., Revtovich, S. V.,

patients, Anticancer Res., 16, 3937-3942.

METHIONINE ADDICTION OF CANCER CELLS

TARGETED BY METHIONINASE

Review

V. S. Pokrovsky^1,2,3*, L. Abo Qoura^1,2, E. A. Demidova¹, Q. Han⁴, and R. M. Hoffman^4,5

¹ N. N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology of Ministry of Health of Russian Federation,

115478 Moscow, Russia; e-mail: v.pokrovsky@ronc.ru

² Research Institute of Molecular and Cellular Medicine,

People’s Friendship University of Russia (RUDN University),

117198 Moscow, Russia; e-mail: louay.ko@gmail.com

³ Department of Biotechnology, Sirius University of Science and Technology, 354340 Sochi, Russia

⁴ AntiCancer Inc., San Diego, CA 92111, USA; e-mail: all@anticancer.com

⁵ Department of Surgery, University of California, San Diego, La Jolla, CA 92037-7400, USA

БИОХИМИЯ том 88 вып. 7 2023