ЖУРНАЛ ОБЩЕЙ ХИМИИ, 2020, том 90, № 4, с. 557-562

УДК 54.051;54.052;54.057;54.058;542.057;543.429.43

ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ ТИРОЗИНА И ТРИПЕПТИДА

(Tyr-Thr-Lys) ЦИКЛОГЕКСИЛ МЕТИЛ- И

(ДЕЙТЕРОМЕТИЛ)ХЛОРФОСФОНАТАМИ

В. А. Яшкир^b, И. В. Рыбальченко^b

^aМосковский государственный университет имени М. В. Ломоносова, Ленинские горы 1/3, Москва, 119991 Россия

^b27 Научный центр Министерства обороны Российской Федерации, Москва, 105005 Россия

^cЗАО «Фарм-Синтез», Москва, 111024 Россия

*e-mail: igorrodin@yandex.ru

Поступило в Редакцию 13 ноября 2019 г.

После доработки 2 декабря 2019 г.

Принято к печати 12 декабря 2019 г.

Разработаны способы фосфорилирования тирозина и трипептида Tyr-Thr-Lys циклогексилметил(дей-

терометил)хлорфосфонатами. Фосфорилированные продукты предназначены для использования в

качестве образцов сравнения при анализе плазмы крови пациентов, предположительно подвергшихся

экспонированию циклогексилметилфторфосфонатом (циклозарином). Определены и оптимизированы

условия хроматографического разделения и очистки полупродуктов синтеза, что позволило получить на

конечном этапе синтеза фосфорилированные продукты высокой степени чистоты.

Ключевые слова: биомаркер, трипептид, фосфорилирование

DOI: 10.31857/S0044460X20040101

Циклогексилметилфторфосфонат (циклозарин)

тами, включая циклозарин, необходимо наличие

входит в число алкил(алкил)фторфосфонатов,

высокочистых соединений сравнения. К числу

включенных в 1 Список Приложения по химика-

последних, согласно литературным данным [3, 4],

там Конвенции о запрещении химического оружия

могут быть отнесены и образующиеся в организме

[1] и подлежащих полному запрету в отношении

продукты взаимодействия циклозарина с тирози-

их разработки, производства, накопления и при-

ном и трипептидом Tyr-Thr-Lys. Разработка спо-

менения. Согласно инструкции по анализу биоме-

собов синтеза высокочистых образцов сравнения

дицнских проб [2], Организацией по запрещению

данных соединений, включая дейтерированные

химического оружия (ОЗХО) предписано осу-

аналоги, явилась целью настоящего исследования.

ществлять выявление в биомедицинских пробах

Получение фосфорилированных производных

биомаркеров приоритетных алкил(алкилфтор)-

тирозина осуществляли по схеме 1, включающей

фосфонатов с установлением их точной струк-

последовательную защиту карбоксильной и амин-

туры. В 4 официальном биомедицинском тесте

ной групп тирозина, рекомендованную в работах

ОЗХО, проведенном в 2019 году, для анализа уча-

[5, 6], фосфорилирование его хлорангидридами

ствующими в тесте национальными лаборатори-

циклогексилметилфосфоновой и циклогексилдей-

ями были представлены образцы плазмы крови

терометилфосфоновой кислот, снятие защитных

человека, экспонированные циклозарином. Опыт

групп с выделением целевых фосфорилированных

участия в данном и предшествующих биомеди-

тирозинов 8а, б.

цинских тестах ОЗХО однозначно указывает на то,

что для достоверной идентификации биомаркеров

Защиту L-тироозина 1 осуществляли в две ста-

экспозиции организма алкил(алкилфтор)фосфона-

дии. Сначала L-тирозин 1 обрабатывали бензило-

557

558

РОДИН и др.

Схема 1.

PTSA, ɬɨɥɭɨɥ, '

NH₂

NEt₃

3 +

HN O

H₂, Pd/C

NH₂

ɚ, ɛ

вым спиртом 2 в присутствии стехиометрического

его предварительной обработки гидридом натрия

количества п-толуолсульфокислоты и получали

в ацетонитриле. По данным хроматографии и

бензиловый эфир L-тирозина в виде соли п-толу-

спектроскопии ЯМР, фосфорилированные бензи-

олсульфоната 3. Далее, при взаимодействии обра-

ловые эфиры N-карбоксибензил-L-тирозина 7а,

зовавшейся соли 3 с карбоксибензилхлоридом 4 в

б, полученные в результате реакции в виде вяз-

ких жидкостей, содержали много примесей. Для

присутствии 2 экв. триэтиламина получали бен-

очистки эфиров использовали метод колоночной

зиловый эфир N-карбоксибензил-L-тирозина 5 в

хроматографии (SiO₂, элюент - хлористый мети-

виде белого кристаллического порошка.

лен-этилацетат, 1:1). В результате были выделены

Необходимые для фосфорилирования цикло-

продукты с чистотой более 90%. На последней

гексилметил(дейтерометил)хлорфосфонаты 6а, б

стадии бензильную и карбоксибензильную защиту

были получены по известной методике [13].

фосфорилированного L-тирозина 7а, б снимали с

В отличие от ранее опубликованной методики

помощью каталитического (10% Pd/С) гидрирова-

[4], фосфорилирование циклогексилметил(дей-

ния молекулярным водородом при атмосферном

терометил)хлорфосфонатами бензилового эфира

давлении. Целевые продукты 8а, б были получены

N-карбоксибензил-L-тирозина 5 проводили после

в виде кристаллических белых порошков, легко

ЖУРНАЛ ОБЩЕЙ ХИМИИ том 90 № 4 2020

ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ ТИРОЗИНА И ТРИПЕПТИДА

559

Схема 2.

RO(O)(OHex-c)Cl

ɚ, ɛ

Boc-Tyr-Thr(OBzl)-Lys(Z)-OBn

RO(O)(OHex-c)-Boc-Tyr-Thr(OBn)-Lys(Z)-OBn

ɚ, ɛ

RO(O)(OHex-c)-Tyr-Thr-Lys

RO(O)(OHex-c)-Tyr-Thr(OBn)-Lys(Z)-OBn

ɚ, ɛ

R = CH₃ (a), CD₃ (ɛ).

растворимых в воде, этаноле, плохо - в хлористом

образцов сравнения при анализе биомедицинских

метилене, ацетонитриле.

проб.

Синтез трипептида Tyr-Thr-Lys, фосфорилиро-

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ванного циклогексилметил(дейтерометил)хлор-

Регистрацию ¹H и ³¹P ЯМР спектров проводили

фосфонатами осуществляли по схеме 2, включа-

на спектрометре QONE AS 400 при 298 K (399.85

ющей взаимодействие хлорангидридов циклогек-

и 161.86 МГц соответственно). Контроль за ходом

силметилфосфоновой и циклогесилдейтероме-

реакций осуществляли с помощью тонкослойной

тилфосфоновой кислот со свободной фенольной

хроматографии на пластинах Marchery-Naglel

ОН-группой тирозина в составе защищенного

AlugramSILG/UV254, детектирование проводили

тирозилтреониллизина Boc-Tyr-Thr(OBzl)-Lys(Z)-

на УФ облучателе Ультрамаг-К254/365 при длине

OBn и последующее снятие защитных групп.

волны 254 нм. Регистрацию масс-спектров вы-

Необходимый для фосфорилирования защи-

сокого разрешения проводили с использованием

щенный трипептид Boc-Tyr-Thr(OBn)-Lys(Z)-OBn

аналитической станции ВЭЖХ-МС Agilent Infinity

9 получали методами классического жидкофазно-

1260/Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos в ре-

го синтеза пептидов [8-12] по схеме, приведенной

жиме электрораспылительной ионизации.

в публикации [14].

Для синтеза фосфорилированного трипептида

Взаимодействие трипептида 9 с циклогексилме-

использовали защищенные аминокислоты произ-

тил(дейтерометил)хлорфосфонатами проводили

водства фирмы «AKos» (Германия).

путем предварительной обработки его суспензии

п-Толуолсульфонат бензилового эфира L-ти-

в ацетонитриле гидридом натрия при 5°С с после-

розина (3). Смесь 10 г (0.055 моль) L-тирозина

дующим добавлением циклогексилметил(дейте-

1, 25 мл бензилового спирта 2, 120 мл толуола и

рометил)хлорфосфонатов 6а, б и выдерживанием

12.6 г (0.066 моль) моногидрата п-толуолсуль-

при 20°С в течение 2 ч. Полученные аддукты 10а,

фокислоты кипятили в течение 7 ч с насадкой

б очищали колоночной хроматографией на силика-

Дина-Старка до полного отделения воды. Смесь

геле, после чего осуществляли поэтапное снятие

охлаждали до комнатной температуры, осадок от-

защитных Boc и бензильных групп с выделением

фильтровывали, промывали диэтиловым эфиром,

целевых соединений 11а, б и 12a, б по методикам,

сушили на воздухе и перекристаллизовывали из

указанным в работе [14].

этанола. Выход 20.7 г (85%), белые кристаллы.

Изучение стабильности полученных соедине-

Бензиловый эфир N-карбоксибензил-L-ти-

ний методами ЯМР ¹H,³¹P и хромато-масс-спек-

розина (5). К раствору 10.9 г (0.0246 моль) п-то-

трометрии показало, что синтезированные про-

луолсульфоната 3 в 100 мл метанола добавляли 5 г

дукты являются стабильными в течение 3 мес, что

(0.0495 моль) триэтиламина. Смесь охлаждали до

делает возможным их использование в качестве

0°С и прибавляли 4.2 г (0.0246 моль) карбоксибен-

ЖУРНАЛ ОБЩЕЙ ХИМИИ том 90 № 4 2020

560

РОДИН и др.

зилхлорида 4. Реакционную массу перемешивали

пуская медленный ток водорода. Катализатор от-

8 ч при 0°С, затем доводили температуру до ком-

фильтровывали, растворитель удаляли в вакууме.

натной. Смесь выливали в 100 мл воды, экстраги-

Остаток растирали с 5 мл ацетонитрила, фильтро-

ровали диэтиловым эфиром (3×100 мл), промыва-

вали и промывали на фильтре 10 мл диэтилового

ли экстракт водой, насыщенным раствором NaCl,

эфира. Получили O-[О-циклогексилметил(дейте-

сушили MgSO₄и концентрировали при понижен-

рометил)фосфонил]-L-тирозины 8а, б с чистотой

ном давлении. Остаток перекристаллизовывали из

около 94%.

смеси гексан-этанол (2:1). Выход 7.93 (80%), белые

О-(О-Циклогексилметилфосфонил)-L-тиро-

кристаллы, т. пл. 102-104°С.

зин (8а). Выход 0.625 г (65%), белые кристаллы.

Общая методика синтеза соединений 7а, б.

Спектр ЯМР ³¹P (D₂O): δ_P 31.76 м. д. Масс-спектр,

К охлажденному до 5°С раствору 0.0042 М. рас-

m/z: 342.3477 [M +Н]⁺.

твора бензилового эфира N-карбоксибензил-L-ти-

О-(О-Циклогексилдейтерометилфосфонил)-

розина 5 в 40 мл безводного ацетонитрила при

L-тирозин (8б). Выход 0.641 г (70%), белые кри-

перемешивании прибавляли 120 мг (0.005 моль)

сталлы. Спектр ЯМР³¹P (D₂O): δ_P 31.92 м. д. Масс-

NaH, предварительно отмытого гексаном от мине-

спектр, m/z: 345.3651 [M + Н]⁺.

рального масла. Полученную смесь перемешивали

Синтез защищенного трипептида Boc-Tyr-

30 мин при комнатной температуре, затем при-

Thr(OBn)-Lys(Z)-OBn 9 проводили по методикам,

бавляли 0.005 моль хлорангидрида циклогексил-

изложенным в ранее опубликованной нами работе

метил(дейтерометил)фосфоновой кислоты 6а, б и

[14]. Ниже приводятся методики его фосфорили-

продолжали перемешивание еще 1 ч, контролируя

рования циклогексилметил(дейтерометил)хлор-

ход реакции по ТСХ. Реакционную смесь упари-

фосфонатами и снятия защиты.

вали в вакууме до половины объема, выливали в

40 мл воды, экстрагировали хлороформом (3×

Общая методика синтеза соединений 10а,

30 мл). Экстракт промывали 20 мл воды, сушили

б. К охлажденной до 5°С суспензии 0.412 г

MgSO₄ и концентрировали при пониженном дав-

(0.0005 моль) защищенного трипептида 9 в 40 мл

лении. Остаток хроматографировали на колонке

безводного ацетонитрила при перемешивании

150×30 мм (SiO₂, GeduranSi 60 40-63 мкм, Merck),

прибавляли 0.17 г (0.0007 моль) гидрида натрия,

элюент - метиленхлорид-этилацетат (1:1). Выде-

предварительно отмытого гексаном от мине-

лены продукты 7a, б с чистотой 96%,

рального масла. Смесь перемешивали 30 мин

О-(О-Циклогексил)метилфосфонат бензило-

при комнатной температуре, затем прибавляли

вого эфира N-карбоксибензил-L-тирозина (7a).

0.0006 моль циклогексилметил(дейтерометил)-

Выход 1.59 г (67%). Спектр ЯМР ³¹P (ДМСО-d₆):

хлорфосфоната 6a, б в 10 мл безводного ацетони-

δ_P 26.87 м. д. Масс-спектр, m/z: 566. 6023 [M + Н]⁺.

трила и перемешивали 2 ч, контролируя ход реак-

ции методом ТСХ. Реакционную смесь упаривали

О-(О-Циклогексил)дейтерометилфосфонат

в вакууме до половины объема, выливали в 40 мл

бензилового эфира N-карбоксибензил-L-тиро-

воды и экстрагировали хлороформом (3×30 мл).

зина (7б). Выход 1.51 г (63%). Спектр ЯМР ³¹P

(ДМСО-d₆): δ_P 27.02 м.д Масс-спектр, m/z: 569.

Экстракт промывали 20 мл воды, сушили MgSO₄,

концентрировали при пониженном давлении.

6197 [M +Н]⁺.

Остаток хроматографировали на колонке 150×

Общая методика синтеза соединений 8а, б. В

30 мм (SiO₂, GeduranSi 60 40-63 мкм, Merck),

прибор для гидрирования при атмосферном дав-

элюент - этилацетат-метиленхлорид (3:1). Выде-

лении помещали 1.59 г бензилового эфира О-(О-

лили продукты 10a, б с чистотой 86% (по данным

циклогексил)метилфосфонил-N-карбоксибен-

³¹P ЯМР).

зил-L-тирозина 7а или 1.51 г бензилового эфира

О-(О-циклогексил)дейтерометилфосфонил-N-кар-

Бензил-N²-(О-бензил-N-{2-[(трет-бутокси-

боксибензил-L-тирозина 7б, 50 мл этанола и 100 мг

карбонил)амино]-3-(4-{[(циклогексилокси)-

10%-ного палладия на активированном угле. При-

(метил)фосфорил]окси}фенилпропаноил)трео-

бор заполняли водородом и встряхивали 8 ч, про-

нил})-N⁶-[(бензилокси)карбонил]лизинат (10a).

ЖУРНАЛ ОБЩЕЙ ХИМИИ том 90 № 4 2020

ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ ТИРОЗИНА И ТРИПЕПТИДА

561

Выход

0.417 г

(84.6%), полукристаллическая

и промывали на фильтре 10 мл диэтилового эфи-

масса. Спектр ЯМР³¹P (ДМСО-d₆): δ_P 26.75 м. д.

ра. Получали О-фосфорилированные трипептиды

Масс-спектр, m/z: 986.1168 [M + H]⁺.

12a, б в виде белой мелкокристаллической массы

Бензил-N²-(О-бензил-N-{2-[(трет-бутокси-

с чистотой около 70% (по данным ВЭЖХ-МС).

карбонил)амино]-3-(4-{[(циклогексилокси)-

Дальнейшую очистку (до 95%) проводили с помо-

(дейтерометил)фосфорил]окси}фенилпропано-

щью препаративной ВЭЖХ.

ил)треонил})-N⁶-[(бензилокси)карбонил]лизи-

[2-Амино-3-(4-{[(циклогексилокси)(метил)-

нат (10б). Выход 0.424 г (85.8%), полукристал-

фосфорил]окси}фенил)пропаноил]треонилли-

лическая масса.Спектр ЯМР³¹P (ДМСО-d₆): δ_P

зин (12a) Выход 0.157 г (65%), белые кристаллы.

26.92 м. д. Масс-спектр, m/z: 989.1342 [M + H]⁺.

Спектр ЯМР ³¹P (D₂O), δ_P, м. д.: 31.60, 31.66. Масс-

Общая методика синтеза соединений 11а, б.

спектр: m/z: 571.6239 [M + H]⁺.

К 0.424 г фосфорилированного трипептида 10a,

[2-Амино-3-(4-{[(циклогексилокси)(дейтеро-

б прибавляли 10 мл 15%-ного раствора безво-

метил)фосфорил]окси}фенил)пропаноил]тре-

дного HСl в диоксане. Смесь перемешивали

ониллизин (12б). Выход 0.173 г (70%), белые

при комнатной температуре 1 ч, затем удаляли

кристаллы. Спектр ЯМР ³¹P (D₂O), δ_P, м. д.: 31.75,

в вакууме растворитель. К остатку добавляли

31.81. Масс-спектр, m/z: 574.6413 [M + H]⁺.

40 мл этилацетата и раствор промывали 5%-ным

раствором гидрокарбоната натрия (2×10 мл), за-

ФОНДОВАЯ ПОДДЕРЖКА

тем 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия

Работа выполнена при финансовой поддержке

в воде. После высушивания сульфатом натрия и

Российского научного фонда (проект № 19-13-

отгонки растворителя остаток в виде аморфной

00057).

белой массы без предварительной очистки подвер-

гали гидрогенолизу для снятия бензильных групп.

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Бензил-N²-{N-[2-амино-3-(4-{[(циклогексил-

Авторы заявляют об отсутствии конфликта ин-

окси)(метил)фосфорил]окси}фенил)пропано-

тересов.

ил]-О-бензилтреонил}-N⁶-[(бензилокси)карбо-

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

нил]лизинат (11a).Спектр ЯМР ³¹P (ДМСО-d₆):

δ_P 26.65 м. д. Масс-спектр, m/z: 886.0009 [M + H]⁺.

1. Convention on the Prohibition of the Development,

Бензил-N²-{N-[2-амино-3-(4-{[(циклогексил-

Production, Stockpiling and Use of Chemical Weapons

окси)(дейтерометил)фосфорил]окси}фенил)-

and their Destruction, Technical Secretariat of the

пропаноил]-О-бензилтреонил}-N⁶-[(бензил-

Organization for the Prohibition of Chemical Weapons,

окси)карбонил]лизинат

(11б). Спектр ЯМР

The Hague, 1993. 179 p. www.opcw.org

³¹P (ДМСО-d₆): δ_P 26.83 м. д. Масс-спектр, m/z:

2. Work instruction for the reporting of the results

889.1838 [M + H]⁺.

of the OPCW biomedical proficiency tests. Quality

Общая методика синтеза соединений 12а, б.

Management System Document no. QDOC/LAB/WI/

В прибор для гидрирования при атмосферном дав-

BioPT04, Revision no. 3. 2019. www.opcw.org.

лении помещали Bn-защищенный фосфорилиро-

3. Black R.M., Read R.W. // Arch. Toxicol. 2013. Vol. 87.

ванный трипептида 11a, б, 50 мл этанола и 50 мг

N 3. P. 421. doi 10.1007/s00204-012-1005-1

свежеприготовленной гидроокиси палладия. При-

4. Williams N.H., Harrison J.M., Read R.W., Black R.M. //

бор заполняли водородом и встряхивали 36 ч, про-

Arch. Toxicol. 2007. Vol. 81. N 9. P. 627. doi 10.1007/

пуская медленный ток водорода, затем добавляли

s00204-007-0191-8

50 мг свежеприготовленной гидроокиси палладия

5. Sato A., Yoshida M., Hara S. // Chem. Commun. 2008.

и продолжали гидрирование еще 36 ч. Контроль

Vol. 14. N 46. P. 6242. doi 10.1039/B814804J

реакции осуществляли методом ВЖЭХ-МС, отби-

рая пробы через каждые 6 ч. Катализатор отфиль-

6. Nakamura H., Fujiwara M., Yamamoto Y. // J. Org.

тровывали, растворитель удаляли в вакууме. Оста-

Chem. 1998. Vol. 63. N 21. P. 7529. doi 10.1021/

ток растирали с 5 мл ацетонитрила, фильтровали

jo980818r

ЖУРНАЛ ОБЩЕЙ ХИМИИ том 90 № 4 2020

562

РОДИН и др.

7. Williams N.H., Harrison J.M., Read R.W., Black R.M. //

Cер. хим. 2016. № 11. С. 2766; Balaev A.N., Osi-

Arch. Toxicol. 2007. Vol. 81. N 9. P. 627. doi 10.1007/

pov V.N., Okhmanovich K.A., Ruchko E.A., Kolotaev A.V.,

s00204-007-0191-8

Khachatryan D.S. // Russ. Chem. Bull. 2016. Vol. 65.

8. Гершкович А.А., Кибирев В.К. Синтез пептидов. Ре-

N 11. P. 2766. doi 10.1007/s11172-016-1651-1

агенты и методы. Киев: Наукова думка, 1987. 264 c.

12. Балаев А.Н., Осипов В.Н., Охманович К.А., Ручко Е.А.,

9. Балаев А.Н., Осипов В.Н., Охманович К.А., Федоров

Барышникова М.А., Хачатрян Д.С. // Изв. АН. Cер.

В.Е. // Хим.-фарм. ж. 2014. Т. 48. № 3. С. 54. doi

хим. 2016. № 12. С. 2948; Balaev A.N., Osipov V.N.,

10.30906/0023-1134-2014-48-3-54-56; Balaev A.N.,

Okhmanovich K.A., Ruchko E.A., Baryshnikova M.A.,

Osipov V.N., Okhmanovich K.A., Fedorov V.E. // Pharm.

Khachatryan D.S. // Russ. Chem. Bull. 2016. Vol. 65.

Chem. J. 2014. Vol. 48. N 3. P. 217. doi 10.1007/

N 12. P. 2948. doi 10.1007/s11172-016-1683-6

s11094-014-1080-0

13. Briseno-Roa L., Hill J., Notman S., Sellers D., Smith A.P.,

10. Балаев А.Н., Осипов В.Н., Федоров В.Е. //

Timperley C.M., Wetherell J., Williams N.H., Willi-

Хим.-фарм. ж. 2014. Т. 48.№ 5. С. 40. doi

ams G.R., Fersht A.R., Griffiths A.D. // J. Med. Chem.

10.30906/0023-1134-2014-48-5-40-42; Balaev A.N.,

2006. Vol. 49. N 1. P. 246. doi 10.1021/jm050518j

Osipov V.N., Fedorov V.E. // Pharm. Chem. J. 2014.

14. Rodin I.A., Baygildiev T.M., Krylov V.I., Osipov V.N.,

Vol. 48. N 5. P. 340. doi 10.1007/s11094-014-1106-7

Krylov I.I.,Yashkir V.A,Rybalchenko I.V. // Russ. J.

11. Балаев А.Н., Осипов В.Н., Охманович К.А., Руч-

Gen. Chem. 2019. Vol. 89. N 10. P. 2103. doi 10.1134/

ко Е.А., Колотаев А.В., Хачатрян Д.С. // Изв. АН.

S1070363219100189

Phosphorylation of Tyrosin and Tyr-Thr-Lys Tripeptide with

Cyclohexylmethyl- and (Deuteromethyl)phosphonochloridates

I. A. Rodina,*, T. M. Baygildiev^a, V. I. Krylov^b, V. N. Osipov^c, I. I. Krylov^b,

V. A. Yashkir^b, and I. V. Rybalchenko^b

^aLomonosov Moscow State University, Moscow, 119991 Russia

^b Laboratory for the Chemical and Analytical Control of the Military Research Center, Moscow, 105005 Russia

^cPharm-Sintez, Moscow111024 Russia

*e-mail: igorrodin@yandex.ru

Received November 13, 2019; revised December 2, 2019; accepted December 12, 2019

A methods for phosphorylation of tyrosin and Tyr-Thr-Lys tripeptide with cyclohexylmethyl(deuteromethyl)-

phosphonochloridates were developed. These products can be used as reference compounds in the analysis of

blood plasma of patients probably exposed to cyclohexylmethylphosphonofluoridate (cyclosarin). Conditions for

the separation and purification of the synthesized intermediates were determined and optimized, which makes

it possible to obtain high-purity phosphorylated products at the final stage of the synthesis.

Keywords: biomarker, tripeptide, phosphorylation

ЖУРНАЛ ОБЩЕЙ ХИМИИ том 90 № 4 2020