ПАРАЗИТОЛОГИЯ, 2022, том 56, № 6, с. 460-468.
УДК 576.895.122
ОБНАРУЖЕНИЕ В МОЛЛЮСКЕ SUCCINEA PUTRIS
СПОРОЦИСТЫ РОДА LEUCOCHLORIDIUM НЕОБЫЧНОЙ ОКРАСКИ
© 2022 г. Р. Р. Усмановаa,*, Е. Е. Прохороваa
aРоссийский государственный педагогический университет имени А.И. Герцена,
Лаборатория экспериментальной зоологии, кафедра зоологии и генетики,
наб. р. Мойки, д. 48, Санкт-Петербург, 191186 Россия
* e-mail: rregina.usmanova@gmail.com
Поступила в редакцию 10.11.2022 г.
После доработки 23.11.2022 г.
Принята к публикации 27.11.2022 г.
На территории Бокситогорского района Ленинградской области (Россия) в моллюске Suc-
cinea putris L., 1758 обнаружена спороциста Leucochloridium sp. со зрелым окрашенным от-
ростком. Показано, что пигментация отростка отличается от таковой спороцист других видов
рода Leucochloridium Carus, 1835, ранее описанных на территории Европы. Наиболее близкими
по окраске к отросткам найденной спороцисты оказались партениты с территории Японии.
Проведено генотипирование обнаруженной спороцисты по фрагментам рДНК (полные ITS1,
ITS2, 5.8S и частичные 18S и 28S нуклеотидные последовательности). Генетические дистанции
между исследуемой спороцистой и представителями ранее описанных видов рода Leucochlo-
ridium в большинстве случаев превышают средние внутривидовые. Это, а также данные мор-
фологического анализа, могут свидетельствовать о принадлежности обнаруженной спороцисты
к самостоятельному, ранее не описанному в Европе виду рода Leucochloridium.
Ключевые слова: трематоды, Leucochloridium, рДНК, генотипирование, окраска отростков
спороцист, Succinea putris
DOI: 10.31857/S0031184722060023; EDN: FHOEXO
Определение трематод, как правило, осуществляется по таким стадиям развития,
как мариты и церкарии. Однако строение партенит трематод рода Leucochloridium
Carus, 1835 (Trematoda, Leucochloridiidae) позволяет проводить видовую идентифи-
кацию по спороцистам. Спороцисты разных видов этого рода различаются формой
и окраской зрелых отростков (см.: Гинецинская, 1968). Валидность этих морфологи-
ческих признаков была подтверждена молекулярно-генетическими методами (Casey
et al., 2003; Zhukova et al., 2014; Ataev et al., 2016).
460
В результате многолетнего (с 2008 г.) анализа зараженности моллюсков Succinea
putris L., 1758 (Gastropoda, Succineidae) на территории европейской части России
и Белоруссии нами были выявлены три вида трематод рода Leucochloridium: L. para-
doxum Carus, 1835, L. vogtianum Baudon, 1881 и L. perturbatum Pojmanska, 1969.
Наиболее часто встречаются спороцисты вида L. paradoxum, отличающиеся зеле-
ной окраской отростков. При этом отмечается определенная вариабельность рисунка
окраски (Усманова, 2021).
В 2017 г. в Бокситогорском районе Ленинградской области была обнаружена
спороциста со зрелым отростком, также окрашенным в зеленый цвет, но характер
пигментации заметно отличался от ранее описанных нами и другими авторами для
L. paradoxum на территории Европы (Гинецинская, 1953; Heckert, 1889; Casey et al.,
2003; Ataev et al., 2016). В то же время, окраска отростка оказалась близка видам
Leucochloridium spp. из Японии (Nakao et al., 2019; Ohari et al., 2019). Для определе-
ния видовой принадлежности найденной спороцисты было проведено молекулярно-
генетическое исследование.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА
Моллюски Succinea putris, зараженные спороцистами Leucochloridium sp. и L. paradoxum,
были обнаружены на территории Ленинградской области (59°28’36.6 N, 33°48’21.0 E). Споро-
циста L. paradoxum была идентифицирована ранее по морфологическим признакам, а также
генотипирована по фрагменту митохондриального гена I субъединицы цитохром с-оксидазы
(GenBank MZ676717.2) (Усманова и др., 2021). Анализ окраски отростков спороцист проводили
с использованием стереомикроскопа Leica M165C и фотокамеры Leica DFC290. Спороцисту
Leucochloridium sp., извлеченную из моллюска, хранили при температуре - 80°C. ДНК вы-
деляли при помощи коммерческого набора ДНК-сорб-С-М (cat. № K1-6-50-Mod) (АмплиСенс,
Россия) согласно инструкции производителя. Генотипирование спороцисты осуществляли
по участку рДНК, включающему полные ITS1, ITS2, 5.8S и частичные 18S и 28S нуклео-
тидные последовательности рДНК. Для ПЦР были использованы три пары специфических
праймеров Br - digl1 (Tkach et al., 2000), dig12 - 1500R (Tkach et al., 2003) и RiboN_F - L2
(Zhukova et al., 2014). Праймер RiboN_F был сконструирован при помощи программы Primer 3
(Untergasser et al., 2012) c использованием нуклеотидной последовательности L. paradoxum
(GenBank, KP938187.1). ПЦР проводили с использованием TaqDNA полимеразы (cat. № EP0401)
(ThermoFisher Scientific, Литва) по описанному ранее протоколу (Prokhorova et al., 2020) c тем-
пературами отжига 54.7, 56.0 и 64.0°C соответственно. Выделение ПЦР-продуктов из агарозного
геля и их очистку производили при помощи коммерческого набора Wizard® SV Gel and PCR
Clean-Up System (cat. № A9281) (Promega, США) согласно инструкции производителя. Секве-
нирование по Сэнгеру осуществляли в коммерческой организации ООО «Синтол».
Анализ секвенограмм, сборку и выравнивание нуклеотидных последовательностей прово-
дили с помощью программ BioEdit v. 7.2.5 (Hall, 1999) и MEGA v. 10.2.4 (Kumar et al., 2018).
Для подсчета генетических расстояний (p-distance) использовали MEGA v. 10.2.4 (Kumar
et al., 2018). Математическая модель для расчета генетических дистанций при построении
филогенетических реконструкций была выбрана с использованием критерия Акаике и Байе-
совского информационного критерия в jModelTest v. 2.1.7 software (Darriba et al., 2012). Для
461
филогенетических реконструкций по ITS1-5.8S-ITS2 участку рДНК была использована двух-
параметрическая модель Джукса-Кантора (Jukes, Cantor, 1969). Филогенетические реконструк-
ции с использованием метода максимального правдоподобия (ML) проводили в программе
MEGA v. 7.0 (Kumar et al., 2016). Бутстреп-поддержка для деревьев, построенных методом ML,
была посчитана на основе 1000 реплик (Felsenstein, 1985). Байесовский анализ (BI) проводили
в программе BEAST v. 2.5 (Bouckaert et al., 2019) с одновременным запуском четырёх цепей
в 10 млн поколений с отбором каждого 1000-го. Достоверность топологии BI-деревьев оценива-
ли по рассчитанной величине апостериорной вероятности. Для визуализации филогенетических
деревьев, сгенерированных с помощью программы TreeAnnotator 1.7.5, использовали программу
последовательностей из GenBank представлены на филогенетических деревьях. Для подсчё-
та внутривидовых генетических дистанций использовали последовательности L. paradoxum
(KP938187.1, LC466801.1, MH101511.1, KP903688.1, JF346883.1, JF274482.1, KP903686.1,
KP903685.1, KP903686.1, JN639012.1, MK377352.1), L. perturbatum (LC466802.1, KP938186.1,
KP903687.1, MK377349.1, MK377351.1, JF331664.1) и L. vogtianum (KU351661.1, KP903691.1,
KP903689.1, KP903690.1) из GenBank.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Морфологический анализ
Основным морфологическим признаком для видовой идентификации спороцист
трематод рода Leucochloridium является форма и окраска зрелых отростков (Гинецин-
ская, 1953; Casey et al., 2003; Ataev et al., 2016). У изучаемой спороцисты обнаруже-
ны молодой (неокрашенный) и зрелый (окрашенный) отростки (рис. 1A).
Дистальный участок зрелого отростка окрашен в коричневый цвет. Далее, на
коричнево-зелёном фоне видны темные бугорки и две поперечные белые полоски.
Ниже выделяется участок, где на белом фоне мозаично расположены зелёные ква-
драты. За этим участком хорошо заметна прерывистая полоса коричневого цвета.
Остальная часть отростка окрашена в жёлтый цвет. Покровы спороцисты образуют
здесь кольцевые складки, окрашенные прерывистыми коричневыми полосками.
Ранее на территории Европы спороцисты с отростками вышеописанного типа
окраски не регистрировались. Наиболее близкими по характеру пигментации явля-
ются спороцисты L. paradoxum (Гинецинская, 1953; Усманова, 2021; Heckert, 1889;
Mönnig, 1922; Bakke, 1980; Casey et al., 2003; Ataev et al., 2016 и др.), у которых
в окраске преобладают зелёный и коричневый цвета (рис. 1B). Однако в окраске от-
ростков спороцист L. paradoxum с территории Европы не отмечается наличие корич-
невой полосы после зелёного участка (рис. 1B). Кроме того, у отростков L. paradoxum
проксимальная часть окрашена иначе (сплошные полоски на светлом фоне) и лишена
кольцевой складчатости.
Из известных описаний отростков спороцист рода Leucochloridium наиболее близки
по окраске к найденной в Бокситогорском районе спороцисты с территории Японии,
которые были определены как виды Leucochloridium sp. (Ohari et al., 2019) и L. para-
doxum (Nakao et al., 2019).
462
Рисунок 1. Спороцисты рода Leucochloridium: A - спороциста Leucochloridium sp., обнару-
женная в моллюске Succinea putris (с - дистальный участок, окрашенный в коричневый цвет;
d - поперечные белые полоски; e - участок белого цвета, на фоне которого мозаично располо-
жены зелёные квадраты; f - прерывистая полоса коричневого цвета; g - часть отростка жёлтого
цвета с характерными светло-коричневыми складками; cp - центральная часть спороцисты;
nb - неокрашенный отросток; t - трубчатые участки. Звёздочка - окрашенный отросток);
B - отросток L. paradoxum (h - зелёный участок; k - проксимальная часть отростка).
Figure 1. Sporocysts of Leucochloridium trematodes. A - sporocyst of Leucochloridium sp., found
in Succinea putris snail (с - distal area of brown color; d - white transverse bands; e - white area
with mosaically arranged green square blocks; f - brown dotted band; g - yellow-colored part of the
broodsac with peculiar lightly brown folds; cp - central part of sporocyst’s stolon; nb - non-colored
broodsac; t - tube. Asterix - colored broodsac). B - broodsac of L. paradoxum (h - green area;
k - proximal part of the broodsac).
Молекулярно-генетический анализ
В результате исследования обнаруженной спороцисты Leucochloridium sp. был по-
лучен участок рДНК протяженностью 1548 п. н. (GenBank, OP709269), включающий
полные нуклеотидные последовательности ITS1, ITS2, 5.8S и частичные 18S и 28S.
На филогенетической реконструкции по фрагменту ITS1-5.8S-ITS2 рДНК (1279 п. н.)
представители семейства Leucochloridiidae формируют одну кладу (рис. 2). Отдель-
ные ветви образованы представителями родов Urogonimus Monticell, 1888 и Urotocus
Looss, 1899, Leucochloridium. Исследуемая спороциста оказывается в одной группе
с L. paradoxum из Японии, Leucochloridium sp. с о-ва Окинава, зелёной спороцистой
из Европы и располагается ближе всего к L. vogtianum.
463
Рисунок 2. Байесовская филогенетическая реконструкция, выполненная по нуклеотидной по-
следовательности ITS1-5.8S-ITS2 рДНК (1279 п. н.) с использованием модели Джукса-Кантора.
Топология дерева совпадает с реконструкцией, полученной методом максимального правдопо-
добия. Указаны значения апостериорных вероятностей для BI и бутстрепные поддержки для
1000 реплик для ML. Указаны номера использованных последовательностей в GenBank.
Figure 2. The Bayesian phylogenetic reconstruction based on nucleotide sequences of ITS1-5.8S-
ITS2 rDNA (1279 b. p.) with the use of Jukes and Cantor model. Tree obtained by the maximum
likelihood method had the same topology. Number at the branch nodes indicates posterior probability
for BI and percentage bootstrap support for 1000 replicates for ML. Numbers of used sequences
from GenBank are shown.
Генетические дистанции по данному фрагменту генома между последовательно-
стями, использованными для построения дерева (рис. 2), представлены в табл. 1. Для
сравнения выявляемых между образцами различий были посчитаны средние внутри-
видовые генетические дистанции для представителей рода Leucochloridium (табл. 2).
В анализе была использована последовательность меньшей длины, чем при построе-
нии дерева (рис. 2), которая, однако, позволила включить в выравнивание большее
число образцов.
Средние генетические дистанции между исследуемой спороцистой и другими
видами рода Leucochloridium по фрагменту ITS1-5.8S-ITS2 рДНК превышают сред-
нюю внутривидовую дистанцию для представителей рода Leucochloridium (табл. 2).
464
Таблица 1. Генетические дистанции (p-distance) между представителями рода
Leucochloridium по фрагменту ITS1-5.8S-ITS2 рДНК (1146 п. н.)
Table 1. Genetic distances (p-distance) between Leucochloridium trematodes
by the ITS1-5.8S-ITS2 rDNA fragment (1146 b. p.)
Leucochloridium
Вид
1
2
3
4
5
sp. OP709269
1
Leucochloridium sp. Green
0.01438
European AY258145.1
2
Leucochloridium paradoxum
0.04167
0.03820
Europe KP938187.1,
MH101511.1
3
Leucochloridium paradoxum
0.01530
0.00278
0.03989
Hokkaido LC466801.1
4
Leucochloridium vogtianum
0.00668
0.01918
0.04840
0.02199
KU351661.1
5
Leucochloridium sp. Okinawa
0.00769
0.01157
0.04086
0.01420
0.01442
LC466800.1
6
Leucochloridium perturbatum
0.03693
0.03122
0.03400
0.03152
0.04369
0.03700
LC466802.1
Таблица 2. Внутривидовые и межвидовые генетические дистанции (p-distanсe)
для рода Leucochloridium по фрагменту ITS1-5.8S-ITS2 рДНК (946 п. н.)
Table 2. Intraspecific and interspecific genetic distances (p-distance)
for Leucochloridium trematodes by the ITS1-5.8S-ITS2 rDNA fragment (946 b. p.)
Показатель
L. paradoxum
L. perturbatum
L. vogtianum
Средняя внутривидовая p-distanсe
0.01987
0.00762
0.00059
Средняя внутривидовая p-distanсe для рода
0.00936
Leucochloridium
Межвидовая p-distanсe с L. paradoxum
0.03329
0.02148
Средняя межвидовая p-distanсe
0.02878
p-distanсe с Leucochloridium sp. OP709269
0.02118
0.03127
0.00029
Средняя p-distanсe между Leucochloridium
0.01758
sp. OP709269 и другими видами рода
Leucochloridium
Исключение составляют L. vogtianum и Leucochloridium sp. с о-ва Окинава: между
последовательностями этих трематод и изучаемой трематоды генетическая дистан-
ция меньше средней внутривидовой. Максимальные дистанции по данному участку
между исследуемой спороцистой и видами L. perturbatum и L. paradoxum превышают
средние межвидовые для рода.
В результате исследования была получена последовательность 28S рДНК неболь-
шой длины (339 п. н.). Этот фрагмент генома является относительно консервативным:
между разными видами рода Leucochloridium генетические дистанции по данному
маркеру не превышают 0.009 (Nakao et al., 2019). Проведённый анализ позволил
выявить единичные (1-4) замены в пределах данного участка (табл. 3). Наибольшие
465
различия наблюдаются между исследуемой спороцистой и L. vogtianum, наимень-
шие - между исследуемой спороцистой и L. paradoxum из Японии. Эти данные не
согласуются с результатами анализа участка рДНК, включающего внутренние транс-
крибируемые спейсеры и 5.8S рДНК, что может объясняться консервативностью 28S,
а также короткой длиной сравниваемого фрагмента.
Таблица 3. Количество замен в нуклеотидных последовательностях фрагмента 28S рДНК
(339 п. н.) трематод рода Leucochloridium
Table 3. Number of differences in sequences of 28S rDNA fragment (339 b. p.) Leucochloridium
trematodes. Line - the absence of differences
Вид
Leucochloridium sp.
1
2
3
4
OP709269
Leucochloridium paradoxum Europe
1
1
KP938187.1, MH101511.1
Leucochloridium paradoxum Hokkaido
2
-
1
LC466801.1
3
Leucochloridium perturbatum LC466799.1
1
-
1
4
Leucochloridium passeri ON219927.1
1
-
1
-
5
Leucochloridium vogtianum KU351661
3
4
3
4
4
Прочерк - отсутствие замен.
По результатам филогенетического анализа фрагмента ITS1-5.8S-ITS2 рДНК
к обнаруженной спороцисте наиболее генетически близки Leucochloridium sp. c о-ва
Окинава (Nakao et al., 2019) и L. vogtianum. Отростки данных спороцист значительно
отличаются по морфологии (форме и/или окраске) от отростка исследуемой спороци-
сты. Партенита L. paradoxum из Японии (Nakao et al., 2019) похожа на обнаружен-
ную нами по пигментации отростков, однако на филогенетической реконструкции
оказывается на большем расстоянии, чем спороцисты с несхожей окраской отростков.
Полученные в ходе морфологического и молекулярно-генетического анализа
данные могут свидетельствовать о высокой степени морфологической изменчиво-
сти какого-либо из известных видов или же о принадлежности обнаруженной спо-
роцисты к самостоятельному виду рода Leucochloridium, не описанному ранее для
Европейского региона. Последнее предположение мы считаем более вероятным, по-
скольку все генотипированные виды рода Leucochloridium характеризуются высокой
внутривидовой консервативностью рДНК (Усманова и др., 2021; Zhukova et al., 2014;
Нeneberg, 2016) и в литературе не описаны случаи обнаружения у спороцист одного
вида принципиально разных по окраске отростков.
БЛАГОДАРНОСТИ
Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного
проекта № 20-34-90012. Филогенетический анализ выполнен при финансовой под-
держке РФФИ в рамках научного проекта № 20-54-15003 НЦНИ_а.
466
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Гинецинская Т.А. 1953. Значение окраски спороцист трематод рода Leucochloridium для диагностики вида.
Доклады АН СССР 88 (1): 177-179. [Ginetsinskaya T.A. 1953. Znachenie okraski sporocist trematod roda
Leucochloridium dlya diagnostiki vida. Doklady USSR Academy of Sciences 88: 177-179. (In Russian)].
Гинецинская Т.А. 1968. Трематоды, их жизненные циклы, биология и эволюция. Ленинград, СССР, Наука,
411 с. [Ginetsinskaya T.A. 1968. Trematodes, their life cycles, biology and evolution. Leningrad, USSR,
Nauka, 411 pp. (in Russian)].
Усманова Р.Р. 2021. Полиморфизм трематод Leucochloridium paradoxum. Международная научная конфе-
ренция студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов-2021», Москва, Россия, 12-23 апреля
2021, 124781. [Usmanova R.R. 2021 Polimorfizm trematod Leucochloridium paradoxum. 28th Interna-
tional Scientific Conference for Undergraduate and Graduate Students and Young Scientists “Lomonosov”,
Moscow, Russia, 12-23 april 2021, 124781 (in Russian)].
Усманова Р.Р., Токмакова А.С., Лопатина О.Д., Прохорова Е.Е. 2021. Генетический полиморфизм трематод
Leucochloridium paradoxum на территории Ленинградской области по фрагменту митохондриального
R.R., Tokmakova A.S., Lopatina O.D., Prokhorova E.E. 2021. Geneticheskij polimorfizm trematod Leu-
cochloridium paradoxum na territorii Leningradskoj oblasti po fragmentu mitohondrial’nogo gena cox1.
Ataev G.L., Zhukova A.A., Tokmakova A.S., Prokhorova E.E. 2016. Multiple infection of amber snails Succinea
putris with sporocysts of Leucochloridium spp. (Trematoda). Parasitology Research 115 (8): 3203-3208.
Bakke T.A. 1980 . A revision of the family Leucochlorididae Poche (Digenea) and studies on the morphology of
BF00009845
Bouckaert R., Vaughan T. G., Barido-Sottani J., Duchêne S., Fourment M., Gavryushkina A., Heled J., Jones
G., Kühnert D., De Maio N., Matschiner M., Fábio Mendes K.F., Müller F.N., Ogilvie H., du Plessis L.,
Popinga A., Rambaut A., Rasmussen D., Siveroni I., Suchard A.M., Wu C.-H., Xie D., Zhang C., Stadler
T., Drummond J.A. 2019. BEAST 2.5: An advanced software platform for Bayesian evolutionary analysis.
Carus C. 1835. Beobachtungen über einen merkwürdigen Schӧngefӓrbten Eingeweidewurm Leucochloridium
paradoxum mihi und dessen parasitishe Erzeugung in einer Landschnecke Succinea amphibia Drap., Helix
putris. Nova acta physico-medica Academiae Caesareae Leopoldino-Carolinae Naturae Curiosum 17 (1):
85-100.
Casey S.P., Bakke T.A., Harris P.D., Cable J. 2003. Use of ITS rDNA for discrimination of European green-and
brown-banded sporocysts within the genus Leucochloridium Carus, 1835 (Digenea: Leucochloridiidae).
Darriba D., Taboada G.L., Doallo R., Posada D. 2012. jModelTest 2: more models, new heuristics and parallel
Felsenstein J. 1985. Confidence limits on phylogenies: an approach using the bootstrap. Evolution 39: 783-791.
Hall T.A. 1999. BioEdit: A user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows
95/98/NT. Nucleic Acids Symposium Series 41: 95-98.
Heckert A. 1889. Untersuchungen über die Entwicklungs- und Lebensgeschichte des Distomum macrostomum.
Bibliotheca Zoologica 1 (4): 5-66.
Heneberg P., Sitko J., Bizos J. 2016. Molecular and comparative morphological analysis of central European para-
sitic flatworms of the superfamily Brachylaimoidea Allison, 1943 (Trematoda: Plagiorchiida). Parasitology
Jukes T.H., Cantor C.R. 1969. Evolution of protein molecules. In: Munro H.N. (ed.). Mammalian protein metabo-
Kumar S., Stecher G., Tamura K. 2016. MEGA7: Molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for Bigger
467
Kumar S., Stecher G., Li M., Knyaz C., Tamura K. 2018. MEGA X: Molecular Evolutionary Genetics Analysis
molbev/msy096
Mönnig H.O. 1922. Über Leucochloridium macrostomum (Leucochloridium paradoxum Carus), ein Beitrag Zur
Histologie der Trematoden. Jena, Gustav Fischer, 61 pp.
Nakao M., Sasaki M., Waki T., Iwaki T., Morii Y., Yanagida K., Watanabe M., Tsuchitani Y., Saito T., Asakawa
M. 2019. Distribution records of three species of Leucochloridium (Trematoda: Leucochloridiidae) in Japan,
with comments on their microtaxonomy and ecology. Parasitology International 72: 101936. https://doi.
org/10.1016/j.parint.2019.101936
Ohari Y., Kuwahara Y., Itagaki T. 2019. Morphological and genetic characterization of green-banded broodsacs
of Leucochloridium (Leucochloridiidae: Trematoda) sporocysts detected in Succinea lauta in Hokkaido,
Prokhorova E.E., Usmanova R.R., Ataev G.L. 2020. An analysis of morphological and molecular genetic characters
for species identification of amber snails Succinea putris (Succineidae). Invertebrate Zoology 17 (1): 1-17.
Tkach V.V., Pawlowski J., Sharpilo V.P. 2000. Molecular and morphological differentiation between spe-
cies of the Plagiorchis vespertilionis group (Digenea, Plagiorchiidae) occurring in European bats,
with a re-description of P. vespertilionis (Müller, 1780). Systematic Parasitology 47: 9-22. https://doi.
org/10.1023/A:1006358524045
Tkach V.V., Littlewood D.T.J., Olson P.D., Kinsella M.J., Swiderski Z. 2003. Molecular phylogenetic analysis
of the Microphalloidea Ward, 1901 (Trematoda: Digenea). Systematic Parasitology 56: 1-15. https://doi.
org/10.1023/A:1025546001611
Untergasser A., Cutcutache I., Koressaar T., Ye J., Faircloth B.C., Remm M., Rozen S.G. 2012. Primer3 - new
Zhukova A.A., Prokhorova E.E., Tokmakova A.S., Tsymbalenko N.V., Ataev G.L. 2014. Identification of species
Leucochloridium paradoxum and L. perturbatum (Trematoda) based on rDNA sequences. Parazitologiya
FINDING OF UNUSUALY COLORED SPOROCYST
OF GENUS LEUCOCHLORIDIUM IN SUCCINEA PUTRIS SNAIL
R. R. Usmanova, E. E. Prokhorova
Keywords: trematodes, Leucochloridium, rDNA, genotyping, coloration of sporocyst’s
broodsacs, Succinea putris
SUMMARY
Leucochloridium sp. Carus, 1835 sporocyst with a mature colored broodsac was found in the
Boksitogorsk District of Leningrad Region (Russia) in Succinea putris L., 1758 snail. The pigmenta-
tion of the sporocyst’s broodsac was shown to differ from ones of other Leucochloridium Carus, 1835
species, previously described for Europe. The obtained sporocyst is most similar by the coloration
of its broodsac to the trematodes of the same genus from Japan. The genotyping of the investigated
sporocyst by the rDNA (ITS1, ITS2, 5.8S complete and 18S и 28S partly sequences) gene fragments
was conducted. Genetic distances between obtained sporocyst and previously described species of
Leucochloridium genus are higher than intraspecific ones in the most cases. This data and data of
morphological analysis can imply that the investigated sporocyst belongs to the separate species of
Leucochloridium genus, previously not discovered in the European region.
468
