Российская сельскохозяйственная наука, 2020, № 6

УДК: 581.138.1:631.4 (571.6)

DOI: 10.31857/S2500262720060095

ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ПРИЗНАКИ РИЗОБИЙ ВИДОВ Sinorhizobium fredii

И Bradyrhizobium japonicum, ОБИТАЮЩИХ В ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫХ ПОЧВАХ

М.В. Якименко, С.А. Бегун, кандидаты биологических наук

Всероссийский научно-исследовательский институт сои,

675027, Амурская область, Благовещенск, Игнатьевское шоссе

E-mail: mariy-y@yandex.ru

С целью всестороннего изучения дальневосточных природных популяций клубеньковых бактерий сои во Всероссийском

научно-исследовательском институте сои (г. Благовещенск) проведены лабораторные эксперименты по выявлению

отличительных признаков ризобий видов Sinorhizobium fredii (Scholla, Elkan, 1984) и Bradyrhizobium japonicum (Jordan,

1982), выделенных в чистую культуру из почв соесеющих регионов Дальнего Востока. Установлено, что штаммы вида

B. japonicum в чашках Петри начинают рост на 7-10-е и даже 20-е сутки после посева, усваивают ограниченный на-

бор источников углеродного питания с выделением продуктов метаболизма в основном щелочного характера, обладают

пониженной осмоустойчивостью. Экстремальные условия среды обитания ризобии этого вида переносят плохо, резко

замедляют рост на кислых и щелочных питательных средах, при высоких температурах (37-42 °С) не растут. В то

же время в оптимальных условиях данный вид ризобий доминирует при нодуляции растений сои, обладая высокой и

устойчивой вирулентностью. Рестриктазный анализ исследуемых штаммов B. japonicum подтвердил их идентичность.

Штаммы вида S. fredii в чашках Петри дают рост на 2-4-е сутки после посева, хорошо усваивают широкий спектр

источников углеродного питания с выделением продуктов метаболизма кислотного характера. Большинство штаммов

этого вида обладает высокой осмоустойчивостью. В группе штаммов S. fredii выделены культуры с универсальными спо-

собностями роста при экстремальных условиях среды обитания (высокая температура, низкие и высокие показатели

рН). Этот вид ризобий может доминировать при формировании симбиотического аппарата в годы с экстремальны-

ми погодными условиями. Анализ результатов ферментативного расщепления гена 16S рРНК исследуемых штаммов

S. fredii рестриктазой HaeIII подтвердил их идентичность. С помощью RAPD-PCR анализа показана внутривидовая

специфичность изучаемых штаммов B. japonicum и S. fredii, следовательно, виды обладают широким полиморфизмом,

что свидетельствует о их популяционной гетерогенности.

DISTINCTIVE FEATURES OF RHIZOBIA SPECIES Sinorhizobium fredii

AND Bradyrhizobium japonicum LIVING IN THE FAR EASTERN SOILS

Yakimenko M.V., Begun S.A.

All-Russian Scientific Research Institute of Soybean,

675027, Amurskaya oblast, Blagoveshchensk, Ignat`evskoe shosse, 19

E-mail: mariy-y@yandex.ru

TIn order to comprehensive study of the Far Eastern natural populations of soybean nodule bacteria, the All-Russian Scientific

Research Institute of Soybean (FSBSI ARSRI of Soybean, Blagoveshchensk) carried out laboratory experiments to identify the

distinctive features of rhizobia species Sinorhizobiumfredii (Scholla, Elkan, 1984) and Bradyronicum Jordan (1982) Jordan, isolated

in pure culture from soils of the Far Eastern regions engaged in soybean cultivation. As a result, it was found that in Petri dishes the

strains of B. japonicum species make a growth on the 7-10th and even the 20th day after sowing, assimilate a limited set of carbon

nutrition sources with the release of metabolic products of mainly alkaline nature, and have reduced osmotic resistance. The rhizobia

of B. japonicum species poorly tolerate to the extreme environmental conditions, they sharply slow down growth (37-42 °С). At the

same in acidic and alkaline nutrient medium. They do not grow at high temperatures time, under optimal conditions, this type of

rhizobia dominates in the nodulation of soybean plants, having high and stable virulence. Restriction analysis of the being studied

B. japonicum strains confirmed their identity. In Petri dishes the strains of S. fredii species make a growth on the 2nd - 4th day after

sowing, they well assimilate a wide range of carbon nutrition sources with the release of acid metabolic products. Most strains of this

species have high osmotic resistance. In the group of S. Fredii strains, cultures that have universal growth abilities under extreme

environmental conditions (high temperature, low and high pH values) were identified. This type of soybean rhizobia can dominate

at the formation of symbiotic apparatus in years with extreme weather conditions. Analysis of results of the enzymatic cleavage of

the 16S rRNA gene of the studied S. Fredii strains by Hae III restriction enzyme confirmed their identity. The conducted RAPD-

PCR analysis showed the intraspecific specificity of the studied B. Japonicum and S. fredii strains, therefore the species have a wide

polymorphism that indicates the population heterogeneity of the species.

Ключевые слова: ризобии сои, Bradyrhizobium japonicum,

Key words: soybean rhizobia, Bradyrhizobium japonicum,

Sinorhizobium fredii, штаммы, вирулентность, экстремальные

Sinorhizobium fredii, strains, virulence, extreme conditions,

условия, продукты метаболизма, рестриктазный анализ,

metabolic products, restriction analysis, RAPD-PCR analysis

RAPD-PCR анализ

Особенность дальневосточного региона - нали-

шустина, В.К. Шильниковой, Л.М. Доросинского, на-

чие в почвах природных популяций ризобий сои. Их

чата во ВНИИ сои в 70-е годы прошлого века [1, 2].

высокая активность позволяет заниматься селекцией

В чистую культуру ежегодно выделяли 11-95 штаммов

микроорганизмов-азотфиксаторов для дальнейшего

ризобий сои, всего за годы исследований - свыше 2000

использования в хозяйственных целях. Работа по под-

форм клубеньковых бактерий этой культуры [3]. До се-

бору питательных сред, отработке и освоению методов

редины 80-х годов ХХ в. существовало мнение, что на

аналитической селекции клубеньковых бактерий сои,

сое могут формировать клубеньки только медленнора-

в основу которых были положены идеи крупнейших

стущие ризобии - Rhizobium japonicum [4, 5]. Поэтому

исследователей микробной азотфиксации - Е.М. Ми-

исследования ризобий на Дальнем Востоке до недав-

Российская сельскохозяйственная наука, 2020, № 6

него времени ограничивались изучением лишь этого

электрофореза осуществляли специализированной си-

вида, хотя первые единичные формы быстрорастущих

стемой обработки изображений «ViTran» (Компания

клубеньковых бактерий были отмечены во ВНИИ сои

«Биоком», Москва).

еще в 70-е годы прошлого века [6]. Многочисленные

RAPD-PCR анализ проводили с праймером М13

данные, полученные в результате использования со-

(5’-GAGGGTGGCGGTTCT-3’) [22]. ПЦР осуществля-

временных методов определения генетического род-

ли в 25 мкл смеси, содержащей: 2,5 мкл 10-кратно-

ства при изучении клубеньковых бактерий, позволили

го ПЦР-буфера («Fermentas», Литва); 1,5 мкл 25 мМ

выделить из рода Rhizobium (Frank, 1889) два само-

MgCl₂; 2,5 мкл смеси из 4 дезоксирибонуклеозидтри-

стоятельных рода - Bradyrhizobium (Jordan, 1982) и

фосфатов (2,5 мМ каждого); 10 рМ праймера; 0,1-0,5

Sinorhizobium (Chen et al., 1988) [7, 8]. Это послужило

мкг ДНК; 1U Taq-полимеразы («Fermentas», Литва).

основанием при выделении чистых культур ризобий

После предварительной денатурации (94 °С, 2 мин)

из дальневосточных природных популяций быстрора-

проводили 30 циклов амплификации в следующих ус-

стущие формы относить к виду Sinorhizobium fredii, а

ловиях: денатурация - 94 °С, 60 с; отжиг - 40 °С, 30 с;

медленнорастущие - к виду Bradyrhizobium japonicum

синтез - 72 °С, 120 с. Продукты ПЦР разделяли в 1,4%-

[9, 10]. В настоящее время коллекция чистых культур

ном агарозном геле с добавлением этидиума бромида

клубеньковых бактерий, нодулирующих сою Всерос-

в камере для электрофореза в 0,5-кратном буфере ТВЕ

сийского научно-исследовательского института сои,

при напряжении 90 В. Визуализацию полос осущест-

насчитывает 289 штаммов [11].

вляли в УФ-трансиллюминаторе.

Цель настоящей работы - выявить отличительные

Результаты и обсуждение. Штаммы амурской

признаки штаммов ризобий сои видов Bradyrhizobium

селекции вида B. japonicum начинали рост в чашках

japonicum и Sinorhizobium fredii, выделенных из почв

Петри на 7-10-е и даже 20-е сутки после посева, ус-

Дальнего Востока, и оценить популяционную измен-

ваивали ограниченный набор источников углеродного

чивость аборигенных ризобий с помощью рестрик-

питания с выделением продуктов метаболизма в ос-

тазного и RAPD-PCR анализов для изучения видового

новном щелочного характера, обладали пониженной

разнообразия дальневосточных природных популяций

осмоустойчивостью (табл.). Экстремальные условия

клубеньковых бактерий сои.

среды обитания переносили плохо, резко замедляли

Методика. Объектами исследований были чистые

рост на кислых и щелочных питательных средах и пре-

культуры ризобий сои двух видов - Bradyrhizobium

кращали его при высоких температурах (37-42 °С). В

japonicum и Sinorhizobium fredii, выделенных из при-

то же время, в оптимальных условиях этот вид ризобий

родных популяций Российского Дальнего Востока. Ти-

доминировал при нодуляции растений сои, обладая вы-

повой штамм для вида B. japonicum В-1967 получен в

сокой и устойчивой вирулентностью.

2014 г. из Всероссийской коллекции микроорганизмов

Штаммы вида S. fredii в чашках Петри давали рост

Института биохимии и физиологии имени Г.К. Скря-

на 2-4-е сутки после посева, хорошо усваивали широ-

бина (г. Пущино), для вида S. fredii - в 1990 г. из китай-

кий спектр источников углеродного питания с выделе-

ской коллекции (штамм КНРб).

нием продуктов метаболизма кислотного характера.

Лабораторные микробиологические эксперименты

Большинство штаммов этого вида обладало высокой

выполняли в соответствии с общепринятыми метода-

осмоустойчивостью. В группе штаммов S. fredii вы-

ми [12-14]. Использовали минерально-растительную

делены культуры с универсальными способностями

питательную среду (МРС). При определении сроков

роста при экстремальных условиях среды обитания

появления и размеров колоний у соевых ризобий про-

(высокая температура, низкие и высокие показате-

водили глубинный микробиологический посев. Чув-

ствительность ризобий к концентрации соли в среде

Отличительные признаки коллекционных штаммов

оценивали по их способности расти на минимальной

ризобий сои видов B. japonicum и S. fredii,

агаризованной питательной среде с различной концен-

выделенных из почв Российского Дальнего Востока

трацией хлористого натрия. Для определения усвоения

различных источников углеродного питания чистые

№

Признак

Вид ризобий сои

культуры ризобий выращивали на МРС, где наряду с

п/п

маннитом использовали другие углеродсодержащие

B. japonicum

S. fredii

соединения. Чтобы обнаружить изменение рН, к МРС

Срок появления колоний в

7-20

2-4

добавляли индикатор бромтимоловый синий из расче-

чашках Петри, сутки

та 5 мл 0,4%-ного спиртового раствора/л среды. Виру-

лентность коллекционных штаммов определяли мето-

Изменение рН среды при

Подщела-

Подкисление

дом выращивания бактеризованных семян в пробирках

выращивании

чивание

(100%)

(до 90%

с питательной средой для растений [15].

штаммов)

Выделение и очистку хромосомной ДНК осущест-

Усвоение

Маннит,

Монозы,

вляли фенольным методом [16, 17]. Полимеразную

углеродсодержащих

глюкоза

олигосахара,

цепную реакцию (ПЦР) проводили на амплификато-

соединений

многоатомные

ре «GeneAmp PCR System 2700» (Applied Biosystems,

спирты и др.

США). Для амплификации генов 16S рРНК исполь-

Осмоустойчивость

Низкая

Высокая

зовали универсальные эубактериальные праймеры:

5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’

(27f,

прямой

Рост на кислых

Прекращает-

Не изменяется

праймер) и

5’-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’

и щелочных средах

ся или

или

замедляется

(1492r, обратный праймер) [18, 19]. Продукты ПЦР раз-

деляли в 1%-ном агарозном геле с добавлением этиди-

Рост при повышенных

Прекра-

Дают рост

температурах (37-42 °С)

щается

ума бромида в камере для электрофореза в 0,5-кратном

буфере ТВЕ по стандартной методике [20]. Выделен-

Вирулентность

Высокая

Пониженная

ные штаммы группировали на основе рестриктазно-

и интенсивность

(до 100%)

(10-100%)

го анализа генов 16S рРНК [21]. Продукты реакции

клубенькообразования у сои

разделяли методом электрофореза в электрофорезной

Потеря способности образо-

Не теряют

Могут терять

камере («Helicon») в 1,3%-ном агарозном геле в буфе-

вания клубеньков

ре TBE при напряжении 90 В. Обработку результатов

(вирулентности) у сои

Российская сельскохозяйственная наука, 2020, № 6

ли рН). Штаммы этого вида

обладают пониженной виру-

лентностью в сравнении с ви-

дом B. japonicum и способно-

стью терять вирулентность в

процессе пересевов. При фор-

мировании симбиотического

аппарата в годы с экстремаль-

ными погодными условиями

данный вид ризобий сои мо-

жет доминировать.

Для оценки популяци-

Рис. 1. Рестриктазный анализ амплифицированных генов 16S рРНК

онной изменчивости абори-

изучаемых штаммов B. japonicum с помощью эндонуклеазы HaeIII; дорожки 2-18 -

генных ризобий были иссле-

рестриктазные профили штаммов: 2 - В-1967, 3 - СМ-42к, 4 - СМ-46, 5 - ММ-121,

дованы

35 коллекционных

6 - БМ-91, 7 - БуД-63, 8 - ТС-196, 9 - 648а, 10 - ТМ-437, 11 - МС-63, 12 - АС-17, 13 -

штаммов видов B. japonicum

ММ-117, 14 - ТА-125, 15 - ТА-40, 16 - ММ-125, 17 - ММ-124, 18 - БМ-58; дорожки

и S. fredii селекции ВНИИ сои

1, 19 - маркер молекулярных масс в парах нуклеотидов (bp) («Fermenas», Литва).

с помощью рестриктазного

и RAPD-PCR анализов. В ка-

честве контролей привлекали

типовые культуры: штамм

В-1967 для вида B. japonicum,

штамм КНРб

- для вида

S. fredii.

С целью дифференциации

изолятов провели сравни-

тельный анализ фрагментов

рестрикции генов 16S рРНК.

Известно, что размер ампли-

фицированного с применени-

ем универсальных эубактери-

Рис. 2. Рестриктазный анализ амплифицированных генов 16S рРНК изучаемых

альных праймеров гена 16S

штаммов S. fredii с помощью эндонуклеазы HaeIII; дорожки 2-19 - рестриктазные

рРНК у всех бактерий состав-

профили штаммов: 2 - КНРб, 3 - МБ-85к, 4 - ББ-87к, 5 - СБ-51к, 6 - КБ11, 7 - ТБ-

ляет около 1450 пар нуклео-

491, 8 - СБ-43к , 9 - ТБ-524к, 10 - ББ-55к, 11 - ОБ-42, 12 - ТБ-522, 13 - ТБ-365, 14

тидов (п.н.). Однако нуклео-

– ТБ-398, 15 - СБ-38, 16 - ТБ-508, 17 - ТБ-587, 18 - ТБ-467к, 19 - ББ-90к; дорожки 1,

тидные последовательности

20 - маркер молекулярных масс в парах нуклеотидов (bp) («Fermenas», Литва).

этого участка гена у разных

видов бактерий различаются.

С помощью эндонуклеаз ре-

стрикции можно различить

бактерии, относящиеся к раз-

ным видам.

Гель-электрофорез про-

дуктов рестрикции штаммов

B. japonicum представлен на

рис.

1. Результаты сравни-

тельного анализа полученных

фрагментов позволили выя-

вить рестриктазные профили

амплифицированных генов

16S рРНК длиной 150, 250,

Рис. 3. RAPD-PCR анализ ДНК изучаемых штаммов B. japonicum

300 и 600 п.н. Следовательно,

с праймером М13; дорожки 2-18 - профили штаммов (см. подпись к рис. 1);

анализ результатов фермен-

дорожки 1, 19 - маркер молекулярных масс в парах нуклеотидов (bp)

тативного расщепления гена

(«Fermenas», Литва).

16S рРНК исследуемых штам-

мов B. japonicum рестрик-

тазой HaeIII, подтвердил их

идентичность.

Гель-электрофорез про-

дуктов рестрикции штаммов

S. fredii представлен на рис.

2. Результаты сравнительно-

го анализа полученных фраг-

ментов позволили выявить

рестриктазные профили ам-

плифицированных генов 16S

рРНК длиной 100, 150, 200,

300 и 600 п.н. Таким образом,

анализ результатов фермен-

Рис. 4. RAPD-PCR анализ ДНК изучаемых штаммов S. fredii с праймером М13;

тативного расщепления гена

дорожки 2-19 - профили изучаемых штаммов (см. подпись к рис .2); дорожки 1, 20 -

16S рРНК исследуемых штам-

маркер молекулярных масс в парах нуклеотидов (bp) («Fermenas», Литва).

Российская сельскохозяйственная наука, 2020, № 6

мов S. fredii рестриктазой HaeIII подтвердил их иден-

5. Shamseldin A., Abdelkhalek A., Sadowsky M.J. Recent

тичность.

changes to the classification of symbiotic, nitrogen-fixing,

Применение одного рестриктазного анализа может

legume-associating bacteria: a review // Symbiosis. -

не выявить полиморфизм при дифференциации близ-

2017. - V. 71. - P. 91-109.

кородственных организмов. Поскольку рестриктазные

6. Бегун С.А., Тильба В.А. Быстрорастущие формы

профили генов 16S рРНК у всех изучаемых штаммов

клубеньковых бактерий сои в почвах Приамурья //

B. japonicum и S. fredii были идентичными, для оцен-

Бюл. ВИР. Санкт-Петербург, 1992. - Вып. 220. - С.

ки популяционной изменчивости использовали более

78- 85.

чувствительный метод - RAPD-ПЦР. Все продукты ам-

7. Акимова Е.С., Гуменко Р.С., Вершинина З.Р., Байми-

плификации имели длину 100-2000 п.н. и давали 6-10

ев Ал.Х., Баймиев Ан.Х. Маркеры для поиска клубень-

продуктов/штамм.

ковых бактерий на основе симбиотических генов //

По результатам фингерпринтов исследуемые штам-

Микробиология. - 2017. - Т. 86. - N 5. - С. 621-628.

мы B. japonicum разделили на 5 групп (рис. 3). Иден-

8. Frugoli J., Dickstein R., Udvardi M.K., Roy S., Liu W.,

тичные RAPD-профили были получены для девяти

Sekhar Nandety R., Crook A., Mysore K.S., Pislariu

штаммов: В-1967, БуД-63, ТС-196, 648а, ТМ-437, МС-

C.I.Celebrating 20 Years of Genetic Discoveries in

63, ММ-117, ТА-125 и ТА-40, их отнесли к группе I. Ко

Legume Nodulation and Symbiotic Nitrogen Fixation //

второй группе отнесли четыре штамма: ММ-125, ММ-

Plant Cell. - 2020. - V. 32. - P. 15-41.

124, БМ-58 и АС-17. По одному представителю групп

9. Scholla M., Elkan G.H. Rhizobium fredii sp. nov., a

III, IV и V составили штаммы СМ-42к, СМ-46 и ММ-

fastgrowing species that effectively nodylates soybeans

121 соответственно.

// Internat. J. System. Bacteriol. - 1984. - V. 34.- N 4. -

Проведенный RAPD-анализ свидетельствует о том,

P. 484-486.

что имеются существенные различия и между исследу-

10. Jordan D.C. Transfer of Rhizobium japonicum,

емыми штаммами S. fredii (рис. 4). Все продукты ам-

Buchanan 1980 to Bradyrhizobium gen. nov., a genus of

плификации имели длину 100-2000 п.н. и давали 5-11

slow grawing root nodule bacteria of leguminous plants

продуктов/штамм. Идентичные RAPD-профили были

// Internat. J. System. Bacteriol. - 1982. - V. 32. - N 1. -

получены для штаммов КНРб, СБ-43к, ТБ-491, отне-

P. 136-139.

сенных к группе I. Ко второй группе отнесены штам-

11. Якименко М.В., Бегун С.А. Основные направления ис-

мы ТБ-522 и СБ-38. У остальных 13 штаммов S. fredii

следований дальневосточных природных популяций

RAPD-профили были полностью не идентичны. RAPD-

ризобий // Вестник ДВО РАН. - 2016. -№ 2. - С. 45-49.

PCR анализ показал внутривидовую специфичность из-

12. Микробиология: практикум / Л.С. Лавренчук, А.А.

учаемых штаммов, следовательно, виды обладают ши-

Ермошин; М-во науки и высш. образования Рос. Фе-

роким полиморфизмом.

дерации, Урал. федер. ун-т. - Екатеринбург: Изд-во

Таким образом, выявлено значительное межвидо-

Урал. ун-та, 2019. - 107 с.

вое различие по культурально-биохимическим свой-

13. Практикум по микробиологии / Под ред. В.А. Шиль-

ствам штаммов B. japonicum и S. fredii дальневосточной

никовой. - М.: Дрофа, 2004. - 256 с.

селекции. В экстремальных условиях среды обитания

14. Лабораторный практикум по микробиологии: учеб-

штаммы быстрорастущего вида S. fredii обладают бо-

ное пособие / Н.А. Клёнова. - Самара: Изд-во «Са-

лее высокой устойчивостью к жизнедеятельности, чем

марский университет», 2012. - 102 с.

штаммы медленнорастущего вида B. japonicum. Одна-

15. Бегун С.А. Способы, приемы изучения и отбора эф-

ко в оптимальных условиях штаммы B. japonicum со-

фективных штаммов клубеньковых бактерий сои.

храняют высокие показатели вирулентности.

Методы аналитической селекции. -Благовещенск:

Рестриктазный анализ амплифицированных генов

Зея, 2005. - 70 с.

16S рРНК изучаемых штаммов B. japonicum и S. fredii

16. Ausubel F.H., Brent R., Kingston R.E., Moore D.D.,

подтвердил их видовую идентичность. Используя бо-

Seidman J.G., Smith J.A., K. Struhl K. Current protocols

лее чувствительный метод - RAPD-PCR анализ ДНК,

in Molecular Biology // John Wiley and Son. - 1994.

удалось отнести штаммы B. japonicum к 5 группам.

17. Петров Д.Г., Макарова Е.Д., Гермаш Н.Н., Антифеев

При этом штаммы вида S. fredii оказались более разно-

И.Е. Методы выделения и очистки ДНК из лизатов

родными, что говорит о популяционной гетерогенно-

клеток (обзор) // Научное приборостроение. - 2019.-

сти видов. Оказалось, что дальневосточные природные

Т. 29. - N 4. - С. 28-50.

популяции более разнообразны по видовому составу.

18. Versalovic J., Schneider M., Bruijn F.J., Lupski J.R.

Genomic fingerprinting of bacteria using repetitive

Литература

sequence-based polymerase chain reaction // Meth. Cell.

1. Доросинский Л.М. Клубеньковые бактерии и нитра-

Mol. Biol. - 1994. - N 5. - P. 25-40.

гин. - Л.: Колос, 1970. - 192 с.

19. Lane D.E. 16S/23S rRNA sequencing // Nucleic acid

2. Мишустин Е.Н., Шильникова В.К. Клубеньковые

techniques in bacterial systematics / Eds. Stacebrandt

бактерии и инокуляционный процесс. - М.: Наука,

E., Goodfellow M. New York: Wiley, 1991. - P. 115-147.

1973. - 340 с.

20. Sambruk J., Frisch E.F., Maniatis T. Molecuar cloning:

3. Тильба В.А., Бегун С.А., Якименко М.В. Природные

a laboratory manual. N.Y.: Cold Spring Harbor, 1989.

популяции ризобий сои и их использование в соевых

-279 р.

агроценозах // Инновационная деятельность аграр-

21. Savelkoul P.H., Aarts H.J., J. de Haas, Dijkshoorn L.,

ной науки в Дальневосточном регионе: Сб. науч.

Duim B., Otsen M., Rademaker J.L., Schouls L., Lenstra

тр./ Россельхозакадемия. Дальневост. региональный

J.A. Amplified-fragment length polymorphism analysis:

науч. центр. Примор. НИИСХ. - Владивосток: Даль-

the state of an art // J. Clin. Microbiol. - 1999. -N 37. -P.

наука, 2011. - 362 с.

3083-3091.

4. Баймиев Ан.Х., Гуменко Р.С., Матниязов Р.Т., Чубу-

22. Torriani S. Use of PCR-Based Methods for Rapid

кова О.В., баймиев Ал.Х. Современная систематика

Differentiation of Lactobacillus delbrueckii subsp.

клубеньковых бактерий // Биомика. - 2013. - Т. 5. - N

bulgaricus and L. delbrueckii subsp. Lactis.// J. Appl.

3-4. - С. 136-157.

and Env. Microb. - 1999. - V. 65. - N 10. - P. 4351-4356.

Поступила в редакцию 26.02.20

После доработки 02.03.20

Принята к публикации 10.04.20