Российская сельскохозяйственная наука, 2022, № 2

УДК 581.829: 581.143.6

DOI: 10.31857/S2500262722020120, EDN: GAOYUM

БИОТЕХНОЛОГИЯ ВЫРАЩИВАНИЯ СУСПЕНЗИОННЫХ

КЛЕТОК Rhaponticum carthamoides (Willd.) - ПЕРСПЕКТИВНОГО ИСТОЧНИКА

ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ВЕЩЕСТВ*

А.Ю. Просеков, член-корреспондент РАН, О.В. Козлова, доктор технических наук, А.Д. Веснина, аспирант

Кемеровский государственный университет,

650000, Кемерово, ул. Красная, 6

E-mail: koledockop1@mail.ru

Для сохранения видового разнообразия левзеи сафлоровидной, которая может быть перспективным источником противо-

опухолевых метаболитов, актуально выращивание клеточных культур в условиях in vitro. Цель исследований - подобрать

оптимальную питательную среду для выращивания суспензионных клеток левзеи сафлоровидной, варьируя ее минеральным

составом и регуляторами роста. Для получения суспензионных клеток in vitro использовали питательные среды различного

минерального состава (Мурасиге-Скуга, Гамборга и Шенка-Хильдебрандта) и регуляторы роста (ауксин - 3-индолилуксусная

кислота (ИУК), цитокинин - кинетин). Параметры культивирования: температура - 26 °С, влажность - 60…70 %,

период светового дня - 16 ч, цикл субкультивирования - 21 день. Для полученных клеточных культур оценивали жиз-

неспособность, индекс роста и удельную скорость роста. Наибольшие величины исследуемых параметров отмечали

при выращивании суспензионных клеток на питательной среде с минеральным составом Шенка-Хильдебрандта (SH)

(жизнеспособность суспензионных клеток 77…82 %, индекс роста 6,11…7,14, удельная скорость роста 0,17…0,21 сут^-1).

Из выбранных и предварительно лиофильно высушенных образцов клеток готовили метанольные экстракты, подвергав-

шиеся анализу методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Суспензионные культуры (наилучшие пока-

затели у образца № 12, выращенном на среде SH с добавлением ИУК и кинетина), как и контрольный образец (метаноль-

ный экстракт измельченного корня растения) содержали ситостерин (контроль - 0,26±0,01 мг/г; № 12 - 1,54±0,02 мг/г),

изофраксидин (соответственно 1,15±0,02 и 3,10±0,04 мг/г), хлорогеновую (44,54±0,14 и 66,87±0,02 мг/г) и кофейную (50,15±0,03

и 54,73±0,06 мг/г) кислоты. Экстракты суспензионных культур (100 мг/мл) проявляли противоопухолевые свойства - цито-

токсическое действие по отношению к опухолевым клеткам (PANC-1, ЛБР2, MDAMB-231, НТ-29). Клеточные культуры,

выращенные на среде SH с добавлением ИУК и кинетина, проявляли наиболее выраженные противоопухолевые свойства,

так как содержали большее количество биологически активных веществ в своем составе. При добавлении экстракта

образца № 12 снижение жизнеспособности опухолевых клеток достигало 40,57…53,23 %.

BIOTECHNOLOGY OF CULTIVATION OF Rhaponticum

carthamoides (Willd.) SUSPENSION CELLS - A PROSPECTIVE SOURCE

OF ANTITUMOR SUBSTANCES

Prosekov A.Yu., Kozlova O.V., Vesnina A.D.

Kemerovo State University,

650000, Kemerovo, ul. Krasnaya, 6

E-mail: koledockop1@mail.ru

To preserve the species diversity of Rhaponticum carthamoides, a Red Book plant that is a promising source of antitumor metabolites,

it is important to grow cell cultures in vitro. The aim of the work is to select the optimal nutrient medium for growing suspension cells

of Rhaponticum carthamoides, varying the mineral composition of the nutrient medium and growth regulators. To obtain suspension

cells in vitro, nutrient media of various mineral compositions (Murashige-Skoog, Gamborg, and Schenk Hildebrandt) and growth

regulators (auxin - 3-indoleacetic acid (IAA), cytokinin - kinetin) were used. Cultivation parameters: 26 °C, humidity 60-70 %, with

a 16 hour daylight period and a 21 day subculture cycle. For the obtained cell cultures, the viability, growth index and specific growth

rate were assessed. The results showed that the highest values of the studied parameters were observed when growing suspension cells

on a nutrient medium with a Schenck-Hildebrandt mineral composition (SH) (viability of suspension cells 77-82 %, growth index

6,11-7,14, specific growth rate 0,17-0,21 day^-1). Methanol extracts were prepared from selected and pre-lyophilized cell samples and

analyzed by high performance liquid chromatography. The results showed that suspension cultures (the best indicators were observed

in sample no. № 12 grown on SH medium supplemented with IAA and kinetin), as well as the control sample (methanol extract of

crushed plant root), contained: sitosterol (control - 0,26±0,01 mg/g; № 12 - 1,54±0,02 mg/g), isofraxidine (control - 1,15±0,02 mg/g;

№ 12 - 3,10±0,04 mg/g), chlorogenic (control - 44,54±0,14 mg/g; № 12 - 66,87±0,02 mg/g) and coffee (control - 50,15±0,03 mg/g;

№ 12 - 54,73±0,06 mg/g) acid. The extracts of suspension cultures (100 mg/ml) exhibited antitumor properties - a cytotoxic effect

on tumor cells (PANC-1, LBR2, MDAMB-231, NT-29). Cell cultures grown on SH medium supplemented with IAA and kinetin

exhibited the most pronounced antitumor properties, since they contained a greater amount of biologically active substances in their

composition. When the extract of sample № 12 was added, the decrease in the viability of tumor cells was achieved by 40,57-53,23 %.

In the course of the work, the composition of the nutrient medium was selected, which allows to grow the biomass of suspension

cultures of Rhaponticum carthamoides cells, which exhibits antitumor properties.

Ключевые слова: левзея сафлоровидная, Rhaponticum

Key words: Rhaponticum carthamoides (Willd.), endemic,

carthamoides (Willd.), эндемик, суспензионная культура, экс-

suspension culture, extraction, antitumor properties.

тракция, противоопухолеве свойства.

*Работа выполнена при поддержке Министерства науки и образования Российской Федерации в рамках ФЦП «Исследования и разработки

по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014-2020 годы», соглашение № 075-02-2018-223 от

26.11.2018, № 075-15-2019-1362 от 14.06.2019 (идентификатор проекта RFMEFI57718X0285).

Российская сельскохозяйственная наука, 2022, № 2

Сегодня актуально использование растительных экс-

Табл. 1. Состав питательных сред, использующихся в

трактов, богатых вторичными метаболитами, проявляю-

данном исследовании, для накопления биомассы суспензи-

щими цитотоксическую и прочую активность, в качестве

онных культур клеток

химиотерапевтических агентов против различных видов

рака. К преимуществам растительных метаболитов

№ об-

Минеральный

Кинетин

ИУК

относят: широкий спектр физиологического действия

разца

состав*

на организм человека, низкую или отсутствующую

токсичность этих соединений и низкую стоимость рас-

тительного сырья [1]. Перспективный источник хими-

ческих соединений, проявляющих противоопухолевую

активность, - левзея сафлоровидная.

Левзея сафлоровидная или маралий корень

(Rhaponticum carthamoides (Willd.)) - многолетнее расте-

В5

ние эндемик (для территории Сибирского федерального

округа), относящееся к семейству сложноцветных. Рас-

тения этого вида встречаются в ассоциациях лугового,

кустарникового и лесного типов растительности, на

субальпийских, реже альпийских, лугах [2, 3]. В фар-

макологии корни и корневища растений используют

в качестве адаптогенного, тонизирующего средства,

стимулирующего работу центральной нервной системы,

снижающего умственную усталость [4]. Известно, что

препараты из этого растения также проявляют проти-

воопухолевую активность, например, по отношению к

*MS - среда Мурасиге-Скуга; В5 - Гамборга; SH - Шенка-

клеткам рака молочной железы человека, глиомы, лей-

Хильдебрандта

кемии, аденокарциномы легких и др. путем индукции

апоптоза [1, 5]. Польза от применения средств на основе

этого растения обусловлена содержанием вторичных ме-

информации по получению суспензионных культур

таболитов, а именно экдистероидов, фенольных кислот,

для этого растения не обнаружено.

флавонойдов, гликозидов и др. [6].

Цель исследований заключается в подборе питатель-

Сегодня большинство биологически актив-

ной среды для культивирования суспензионной куль-

ных веществ (БАВ) извлекают из дикорастущего

туры левзеи сафлоровидной, используемой в качестве

сырья, то есть происходит изъятие растений из

источника БАВ противоопухолевой направленности.

естественной среды обитания, которое приводит к

Методика. Объект исследования - биомасса суспен-

уничтожению видового разнообразия и нарушению

зионной культуры левзеи сафлоровидной (см. рисунок).

экологической обстановки [1]. К тому же этот вид

Для ее выращивания использовали экспланты - четырех-

внесен в Красную книгу Кузбасса [7], следователь-

недельные проростки семян, полученные по методике,

но, для сохранения экологической стабильности и

описанной в работе E. Skała и ее коллег [10]. Семена при-

видового разнообразия актуально использование

обретены в коллекции Е.К. Сироткина (Россия). Перед

современных достижений биотехнологии, а имен-

стерилизацией проводили их стратификацию путем вы-

но выращивание клеточных культур (каллусных,

держивания при +4 °C в течение двух недель. Стерильные

суспензионных и бородатых корней) в условиях in

проростки подвергали каллусогенезу, согласно методике

vitro [8]. По результатам предварительного изучения

Н.А. Величко [12]. Для получения суспензионной куль-

доступной литературы за рубежом, в условиях in

туры рыхлые каллусы (300…400 мг) переносили на

vitro чаще всего выращивают корневую культуру

жидкие среды (в колбы на 250 мл, содержащие 25 мл

левзеи сафлоровидной - бородатые корни [1, 9, 10].

жидкой питательной среды, состав сред представлен в

Отечественные исследователи отдают предпочтение

табл. 1) и культивировали на стационарной круговой

технологии выращивания каллусных культур [11, 12],

качалке при 95…100 об/мин (шейкер-инкубатор ES-

Схема получения суспензионной культуры in vitro из стерильных семян левзеи сафлоровидной.

Российская сельскохозяйственная наука, 2022, № 2

20/60, Biosan, Латвия). Для экспериментов использовали

Детектирование проводили при длине волны - 276

среды с минеральным составом по прописям Мурасиге-

нм. Содержание БАВ в полученных суспензионных

Скуга, Гамборга и Шенка-Хильдебрандта [13, 14] с до-

клетках сравнивали с контролем - концентрацией БАВ

бавлением гидролизата казеина (0,5 г/л), мезоинозита

в метанольном экстракте измельченных корней расте-

(0,1 г/л), 3 % сахарозы, 0,5 % агара. Всего изучали 12

ния, собранного на территории Кемеровской области, в

вариантов питательных сред, отличающихся по соста-

горах Кузнецкого Алатау. Количественное содержания

ву регуляторов роста, в качестве которых выступали

идентифицированных веществ проводили методом

3-индолилуксусная кислота (ИУК) и кинетин. На 21 день

внешнего стандарта. Содержание исследуемых рас-

культивирования осуществляли пересев надосадочной фрак-

тительных БАВ определяли с использованием соот-

ции клеток, постепенно увеличивая степень разбавления от

ветствующих калибровочных кривых, построенных в

1/2 до 1/8 (соотношение объема инокулята к объему свежей

диапазоне концентраций 0,05…200 мкг/мл.

питательной среды) и сокращая цикл субкультивирования.

Противоопухолевую активность экстрактов суспен-

Суспензионные клетки культивировали в климатической

зионных культур к клеточным линиям PANC-1, ЛБР2,

камере KBF P (Binder GmbH, Германия) в стерильных

MDAMB-231, НТ-29 (Cancer Center Karolinska, Швеция)

условиях при 16 часовом световом дне, температуре 26 °С,

оценивали по методике, представленной в работе Й. Янга

влажности 60…70 %, цикл субкультивирования 21 день.

и его коллег [17]. Для оценки жизнеспособности опу-

Все работы осуществляли в стерильных условиях

холевые клетки (посевная концентрация 75…100 тыс.

ламинар-боксов БМБ-II-«Ламинар-С»-1,2 NEOTERIC

клеток в 1 мл) инкубировали в 96-луночном планшете

(ЗАО «Ламинарные системы», Россия). Все реактивы

в течение ночи (примерно 12 ч). Затем к ним добавляли

для выращивания каллусных и суспензионных культур

экстракты суспензионных культур (100 мг/мл) и инку-

приобретены в ООО «Диаэм» (Россия).

бировали в течение 72 ч. Предварительно полученные

В ходе исследования оценивали следующие росто-

экстракты суспензионных культур сушили с использова-

вые параметры суспензионных культур на 21 сутки

нием роторного испарителя RV 8 V-C (IKA-Werke GmbH

выращивания: жизнеспособность (v, %), индекс роста

& Co. KG, Германия). Культивирование опухолевых

(I), удельная скорость роста в экспоненциальной фазе

клеток и их инкубацию с экстрактом осуществляли

(µ, сут^-1). Методики оценки представлены в ранее опу-

в CO₂-инкубаторе C 150 (Binder GmbH, Германия) в

бликованных работах авторов [15].

атмосфере, содержащей 5 % CO₂, при 37 ºС [18]. После

В образцах, которые характеризовались наибольши-

этого в каждую лунку добавляли реагент WST-1 (Abcam,

ми ростовыми параметрами, определяли содержание

Великобритания) и инкубировали в течение 2 ч. Погло-

БАВ. Пробоподготовка к проведению анализа мето-

щение измеряли при 450 нм с помощью многорежимного

дом высокоэффективной жидкостной хроматографии

ридера GloMax Multi (Promega, США) [19].

(ВЭЖХ) заключалась в высушивании биомассы в

Статистическую обработку данных выполняли с

лиофильных условиях, приготовлении на ее основе

использованием компьютерной программы Microsoft

метанольных экстрактов (параметры экстракции пред-

Excel. В тексте работы приведены средние арифмети-

ставлены в работе E. Skała [16]) в ультразвуковой бане

ческие величины параметров±стандартное отклонение.

FS14H (Fisher scientific, США) в течение 240 мин. После

Значения в таблицах соответствуют максимальным

отбирали 1 мл экстракта, подвергавшийся центрифу-

величинам доверительных интервалов при 95 %-ном

гированию в течение 15 мин при 8000 об/мин (цен-

уровне вероятности по t-критерию Стъюдента. Все

трифуга 5430 R, Eppendorf, Германия). Супернатант

эксперименты проводили не менее чем в трехкратной

в количестве 0,5 мл анализировали на хроматографе

повторности.

Shimadzu LC-20 Prominence (Shimadzu Corp., Япония)

Результаты и обсуждение. Наибольшие величины

с использованием детектора, оснащенного диодной ма-

исследуемых показателей отмечены на питательных

трицей Shimadzu SPD-20-MA (Shimadzu Corp., Япония),

средах, имеющих основу SH: жизнеспособность кле-

рефрактометрическим детектором RID-10А (Shimadzu

ток - от 77 % до 82 %, индекс роста - от 6,11 до 7,14,

Corp., Япония) и колонкой Zorbax С-18 (150×4,6 мм,

удельная скорость роста - от 0,17 сут^-1 до 0,21 сут^-1

размер частиц фазы 5 мкм). В качестве компонентов

(табл. 2). Кроме того, для достижения наибольших по-

подвижной фазы использовали смесь растворителей -

казателей роста суспензионных клеток, не зависимо от

ацетонитрил (растворитель А) и 0,1 %-ная трифторук-

минерального состава среды, целесообразно совместное

сусная кислота (В). Разделение осуществляли в режиме

использование всех исследуемых регуляторов роста

с градиентной и изократической составляющими: 0

(кинетина и ИУК).

мин - 20 % А, 4 мин - 55 % А, 14 мин - 55 % А, 16

И корень, и суспензионные культуры клеток левзеи

мин - 20 % А. Скорость потока составляла 1 мл/мин,

сафлоровидной накапливают ситостерин, хлорогеновая

температура колонки 24 ºС; объем пробы - 20 мкл.

кислоту, изофраксидин, кофейную кислоту. Сравнение

Табл. 2. Ростовые характеристики суспензионных культур клеток левзеи сафлоровидной

(начальная плотность культур по сухой биомассе клеток ~2,0 г/л)

Образец

Показа-

тель

v, %

76,07

76,03

80,00

81,07

68,13

69,10

72,07

77,00

79,00

80,03

82,00

±1,77

±0,90

±0,17

±0,15

±0,75

±0,87

±0,38

±0,29

±0,26

±0,36*

±0,32

±0,85

6,21±

6,62±

6,52±

6,81±

5,62±

5,74±

5,73±

5,74±

6,11±

6,91±

7,05±

7,14±

0,08

0,04

0,05

0,03*

0,01*

0,04

0,03

0,01

0,02

0,01*

0,03*

0,02*

µ, сут-1

0,18±

0,17±

0,20±

0,21±

0,18±

0,19±

0,20±

0,17±

0,18±

0,20±

0,21±

0,01

0,00

0,02

0,01

0,03

0,01

0,04

*величины статистически значимо (р<0,05) отличаются от остальных (по критерию Стьюдента).

Российская сельскохозяйственная наука, 2022, № 2

Табл. 3. Результаты анализа содержания основных БАВ в

и др. [16, 18, 20]. Для более полного понимания механизм

экстрактах лиофильно высушенных образцов биомассы су-

действия экстрактов левзеи сафлоровидной на опухоле-

спензионных культур клеток in vitro левзеи сафлоровидной

вые клетки (PANC-1, ЛБР2) необходимы дальнейшие

исследования.

Содержание БАВ, мг/г сухой массы

Таким образом, в ходе проведенной работы был

установлен оптимальный состав питательной среды для

хлоро-

№ образца ситосте-

изофракси-

кофейная

культивирования суспензионных культур клеток лев-

геновая

рин

дин

кислота

зеи сафлоровидной - это среда Шенка-Хильдебрандта

кислота

с внесением регуляторов роста - ИУК и кинетина.

Контроль

0,26±0,01*

44,54±0,14*

1,15±0,02*

50,15±0,03*

Культивирование на таком питательном субстрате в

1,42±0,02*

65,16±0,12*

3,04±0,02

53,35±0,15

течение 21 суток позволило получить культуры клеток

с жизнеспособностью от 77 % до 82 %, индексом роста

1,48±0,01

66,02±0,02*

3,06±0,01

53,4±0,03

от 6,11 до 7,14, удельной скорость роста от 0,17 сут^-1

1,50±0,02

66,25±0,11*

3,09±0,03

54,23±0,06*

до 0,21 сут^-1. По качественному содержанию БАВ

(ситостерин, хлорогеновая кислота, изофраксидин, ко-

1,54±0,02

66,87±0,02*

3,10±0,04

54,73±0,06*

фейная кислота) экстракты из суспензионных культур

*статистически значимо (р<0,05) отличаются от остальных (по

не уступали экстрактам из корня растения. Среднее

критерию Стьюдента).

содержание БАВ в экстракте суспензионных культур

выше, чем в экстракте из растения: ситостерина - в

количества БАВ между экстрактами суспензионных

5,70 раза; хлорогеновой кислоты - в 1,48 раза; изофрак-

культур клеток, обладающих наилучшими ростовыми

сидина - в 2,66 раза; кофейной кислоты - в 1,07 раза.

показателями, свидетельствует, что наибольшее их со-

Все исследуемые экстракты (концентрацией 100 мг/мл)

держание наблюдается при выращивании культуры на

проявляли противоопухолевые свойства по отношению

питательной среде № 12 (табл. 3). Причем количество

к ряду клеточных линий.

ситостерина в клеточной культуре примерно в 5,9 раз

выше, чем в экстракте из корня растения, хлорогено-

Литература

вой кислоты - примерно в 1,5 раза, изофраксидина - в

Rhaponticum carthamoides Transformed Root Extract

2,6 раз, кофейной кислоты - в 1,1 раза. Полученные дан-

Has Potent Anticancer Activity in Human Leukemia

ные свидетельствуют о целесообразности выращивания

and Lung Adenocarcinoma Cell Lines / E. Skała,

суспензионных культур клеток, используемых в качестве

E. Synowiec, T. Kowalczyk, et al. // Oxidative medicine

альтернативного источника БАВ.

and cellular longevity. 2018. Vol. 2018. Article ID

8198652. URL: https://www.hindawi.com/journals/

Табл. 4. Результаты определения противоопухолевых

свойств экстрактов из высушенной биомассы суспензион-

16.10.21). doi:10.1155/2018/8198652.

ных культур клеток, выращенных на питательных средах с

Kokoska L., Janovska D. Chemistry and pharmacology of

минеральной основой SH, %¹

Rhaponticum carthamoides: A review // Phytochemistry.

2009. Vol. 70. No. 7. Р. 842-855. doi: 10.1016/j.

Об-

Клеточная линия

phytochem.2009.04.008.

ра-

Соловьева М. А. Факторы, влияющие на содержание

зец

PANC-1

ЛБР2

MDAMB-231

НТ-29

20-гидроксиэкдизона в левзее сафлорофидной (обзор)

51,90±1,51

55,53±0,66

51,47±0,92

42,47±0,55

// Вестник Пермского федерального исследователь-

ского центра. 2020. № 4. С. 62-75. doi: 10.7242/2658-

50,73±0,61

54,93±0,75

51,17±0,15

41,90±1,00

705X/2020.4.6.

50,40±1,17

54,53±0,35

44,93±0,87

41,33±1,70

Norsesquiterpene hydrocarbon, chemical composition

49,20±0,95

53,23±0,70*

44,07±0,80

40,57±0,50

and antimicrobial activity of Rhaponticum carthamoides

root essential oil / J. Havlik, M. Budesinsky, P. Kloucek,

¹контроль не рассматривался, так как содержание БАВ в этом об-

et al. // Phytochemistry. 2009. Vol. 70 (3). P. 414-418.

разце было заметно ниже, чем в образцах №9…12;

doi: 10.1016/j.phytochem.2008.12.018.

*статистически значимо (р<0,05) отличаются от остальных (по

Rhaponticum carthamoides transformed root extract

критерию Стьюдента).

inhibits human glioma cells viability, induces double

strand DNA damage, H2A.X phosphorylation, and

Все экстракты из биомассы суспензионных клеток

PARP1 cleavage / E. Skała, M. Toma, T. Kowalczyk, et

растения обладали противоопухолевыми свойствами

al. // Cytotechnology. 2018. 70 (6). P. 1585-1594. doi:

в отношении тестируемых клеточных линий, так как

10.1007/s10616-018-0251-3.

вызывал снижение жизнеспособности опухолевых

Caffeoylquinic Acids with Potential Biological Activity

клеток. Следует отметить, что наиболее выраженными

from Plant In vitro Cultures as Alternative Sources of

цитотоксическими свойствами отличался экстракт из вы-

Valuable Natural Products / E. Skała, J. Makowczyńska,

сушенной биомассы, полученной при культивировании

J. Wieczfinska, et al. // Current pharmaceutical design.

in vitro на среде № 12 - снижение жизнеспособности

2020. Vol. 26 (24). P. 2817-2842. doi: 10.2174/138161

опухолевых клеток достигало 40,57…53,23 %. Пред-

2826666200212115826.

положительно более эффективное противоопухолевое

Андреев Б. Г., Волобаев П. А., Горбунова И. А. и т.д.

действие по отношению к линиям НТ-29 и MDAMB-231

Красная книга Кузбасса / 3-е издание, переработан-

обусловлено преобладающим содержанием в экстрактах

ное и дополненное. Кемерово: «ВЕКТОР-ПРИНТ».

хлорогеновой кислоты. Она влияет на выживаемость

2021. Т. 1. 240 с.

клеток рака толстой кишки и молочной железы путем

Растительная биотехнология - способ рациональ-

нарушения митохондриальной структуры и апоптоза

ного использования биосинтетического потенциала

клеток - расщепления белка PARP-1, активация каспазы

/ В. Решетников, Е. Спиридович, Т. Фоменко и др. //

9, изменения в экспрессии Bcl-2, Bax, циклина D1/CDK4

Наука и инновации. 2014. № 5(135). С. 21-25.

Российская сельскохозяйственная наука, 2022, № 2

9. The Essential Oils of Rhaponticum carthamoides Hairy

университета. Серия: Пищевые и биотехнологии.

Roots and Roots of Soil-Grown Plants: Chemical

2021. Т. 9. № 3. С. 41-52. doi: 10.14529/food210305.

Composition and Antimicrobial, Anti-Inflammatory, and

16. Inhibition of human glioma cell proliferation by altered

Antioxidant Activities / E. Skała, P. Rijo, C. Garcia, et al.

Bax/Bcl-2-p53 expression and apoptosis induction by

// Oxidative medicine and cellular longevity. 2016. vol.

Rhaponticum carthamoides extracts from transformed

2016. Article ID 8505384. URL: https://www.hindawi.

and normal roots / E. Skała, P. Sitarek, M. Toma, et al. //

com/journals/omcl/2016/8505384/ (дата обращения:

The Journal of pharmacy and pharmacology. 2016. Vol.

16.10.21). doi:10.1155/2016/8505384.

68 (11). P. 1454-1464. doi: 10.1111/jphp.12619.

10. Establishment of hairy root cultures of Rhaponticum

17. Изучение физико-химических свойств и биологиче-

carthamoides (Willd.) Iljin for the production of biomass

ской активности экстрактов из высушенной био-

and caffeic acid derivatives / E. Skała, A. Kicel, M.A.

массы каллусных, суспензионных клеток и корневых

Olszewska, et al. // BioMed research international.

культур in vitro / Йонг Янг, Л. К. Асякина, О. О. Бабич

2015. Vol. 2015. Article ID 181098. URL: https://www.

и др. // Техника и технология пищевых производств.

hindawi.com/journals/bmri/2015/181098/ (дата обра-

2020. Т. 50. № 3. С. 480-492. doi: 10.21603/2074-9414-

щения: 15.10.21). doi: 10.1155/2015/181098.

2020-3-480-492.

11. Величко Н. А., Смольникова Я. В. Влияние тех-

18. Effect of Angelica gigas Nakai Ethanol Extract and

нологических параметров экстракции на выход

Decursin on Human Pancreatic Cancer Cells / B.

экстрактивных веществ из левзеи сафлоровидной

Kweon, Y.H. Han, J.Y. Kee, et al. // Molecules (Basel,

(Rhaponticum carthamoides) // Вестник КрасГАУ.

Switzerland). 2020. Vol. 25(9). 2028. URL: https://www.

2017. № 10(133). С. 73-78.

mdpi.com/1420-3049/25/9/2028#cite (дата обращения:

12. Пат. № 2130709. Способ получения соматических

16.10.21). doi: 10.3390/molecules25092028.

эмбриоидов в культуре in vitro левзеи сафлоровидной

19. Quantitative and qualitative profile of biologically active

/ Н.А. Величко, Е.В. Никонорова, С.М. Репях и др.;

substances extracted from purple echinacea (Есhinасеа

патентообладатель: Сибирский государственный

Рurрurеа L.) growing in the Kemerovo region: functional

технологический университет. опубл. 27.05.1999.

foods application / A.V. Zaushintsena, I.S. Milentyeva,

13. Murashige T., Scoog F. A Revised Medium for Rapid

O.O. Babich, et al. // Foods and Raw Materials. 2019.

Growth and Bio Assays with Tobacco Tissue Culture //

Vol. 7(1). P. 84-92. doi: 10.21603/2308-4057-2019-1-

Physiology Plantarum. 1962. № 15. Р. 473-497.

84-92.

14. Gamborg O.L., Miller R.A., Ojima O. Nutrient

20. Chlorogenic Acid and Its Microbial Metabolites Exert

requirements of suspension cultures of soybean root cells

Anti-Proliferative Effects, S-Phase Cell-Cycle Arrest

// Exp. Cell Res. 1968. № 50 (1). P. 151-158.

and Apoptosis in Human Colon Cancer Caco-2 Cells

15. Подбор системы аппаратурного выращивания су-

/ S. Sadeghi Ekbatan, X.Q. Li, M. Ghorbani, et al. //

спензионных культур клеток и корневых культур in

International journal of molecular sciences. 2018. Vol.

vitro в биореакторах различной конструкции и объе-

19(3). 723. URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/

ма / Л. К. Асякина, Л. С. Дышлюк, А. В. Позднякова и

articles/PMC5877584/# (дата обращения: 16.10.21).

др. // Вестник Южно-Уральского государственного

doi: 10.3390/ijms19030723.

Поступила в редакцию 19.11.2021

После доработки 22.12.2021

Принята к публикации 02.02.2022