Биология моря, 2020, T. 46, № 1, стр. 70-72

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА

Материал собирали в зал. Восток Японского моря в районе с координатами 42°53ʹ N, 132°44ʹ E. Тихоокеанскую мидию Mytilus trossulus Gould, 1850 (13 проб) отбирали с сентября 2009 г. по октябрь 2010 г. (табл. 1), приморского гребешка Mizuhopecten yessoensis Jay, 1857 (6 проб) – с января по июнь 2010 г. с глубины около 10 м. У тихоокеанской мидии брали все мягкие ткани, у приморского гребешка – только мускул. В зависимости от размера особи, каждая проба – это материал от 5–10 животных; масса одной пробы составляла 50 г. До проведения анализа пробы хранили при температуре –80°C. В лаборатории пробу гомогенизировали с помощью блендера, 4 г гомогената экстрагировали в 16 мл 50% раствора метанола, центрифугировали в течение 10 мин при 3000 оборотов при комнатной температуре и затем отбирали супернатант. Непосредственно перед проведением анализа аликвоту получившегося экстракта разбавляли буферным раствором (10% метанол в фосфатном буфере с твином 20, рН 7.4). Экстракт анализировали в трех повторностях (57 измерений). Содержание домоевой кислоты измеряли методом конкурентного иммуноферментного анализа с помощью набора реагентов ASP direct cELISA kit (Biosense Laboratories AS, Norway, AOAC Official method 2006.02) в соответствии с рекомендациями производителя (https://stylab.ru/netcat_files/userfiles/Flyers/Algal_toxins/ASP_ELISA.pdf). Данная методика рекомендована международной Ассоциацией аналитических сообществ (AOAC International) в качестве официального метода при рутинных мониторинговых исследованиях количественного содержания домоевой кислоты в съедобных моллюсках (Kleivdal et al., 2007; AOAC International, 2012). Она отличается высокой селективностью и чувствительностью, а также легкостью выполнения измерений по сравнению с инструментальным методом ВЭЖХ-УФ (предел количественного определения 0.5 мг/кг). Оптическую плотность растворов измеряли с помощью микропланшетного фотометра BioTek ELx800 (BioTek, USA) при длине волны 450 нм. Предел обнаружения метода cELISA составляет 0.003 мг/кг, предел количественного определения – 0.011 мг/кг.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В результате круглогодичных наблюдений было установлено, что ДК в тканях тихоокеанской мидии присутствовала с октября по февраль; весной, летом и в начале осени в тканях этого моллюска амнезиотоксин не найден (табл. 1). В тканях приморского гребешка ДК была обнаружена в январе–марте, а в апреле–июне токсин не найден. Концентрация ДК в тканях моллюсков была низкой: от 0.003 до 0.1 мг/кг в пробах M. trossulus и от 0.003 до 0.09 мг/кг в пробах M. yessoensis. Установлено, что ДК присутствовала в 37% изученных проб. Максимальная концентрация амнезиотоксина (около 0.1 мг/кг) в тканях обоих видов зарегистрирована в конце января (табл. 1). Полученные результаты изменили наше представление о сезонах, в течение которых в зал. Петра Великого возможно загрязнение двустворчатых моллюсков фикотоксинами. Ранее считали, что загрязнение происходит только в летне-осенний период (Orlova et al., 2015; Stonik et al., 2019).

Известно, что содержание фикотоксинов в моллюсках в большей степени связано с концентрацией токсичного фитопланктона, отмеченной ранее, чем с его концентрацией, установленной одновременно с измерением токсичности моллюсков (Bricelj, Shumway, 1998). Сезонные исследования фитопланктона, проведенные в зал. Восток в мае–октябре 2009 г., позволили выявить массовое развитие в сентябре–октябре токсичной диатомовой водоросли Pseudo-nitzschia calliantha Lundholm, Moestrup et Hasle, 2003, плотность которой составляла 50–96 тыс. кл/л (М.С. Селина, личное сообщение). Эти сведения, а также установленная ранее высокая токсичность клонов P. calliantha из зал. Петра Великого (Stonik et al., 2019) свидетельствуют о том, что данный вид водорослей можно рассматривать как потенциальный источник ДК в моллюсках из района исследования.

Интенсивные и масштабные токсичные “цветения” Pseudo-nitzschia и связанное с ними накопление ДК в моллюсках до экстремально высоких значений (более 300 мг/кг), а также многочисленные случаи гибели морских птиц и млекопитающих характерны для тихоокеанских прибрежных вод США (Lelong et al., 2012; Trainer et al., 2012). В северо-западной части Тихого океана отравления людей и морских животных, обусловленные “цветениями” Pseudo-nitzschia, не зарегистрированы. Однако и в этом районе возможны случаи существенного накопления амнезиотоксина в моллюсках. Так, содержание ДК выше утвержденного предельного допустимого уровня концентрации (20 мг/кг), при котором вводится запрет на добычу и употребление в пищу моллюсков (http://files.foodmate.com/2013/files_930.html), зарегистрировано в мидиях из прибрежных вод Кореи (Lee, Baik, 1997) и о-ва Сахалин, где концентрация токсина в трех пробах приморского гребешка превышала предельно допустимую в 3.0–5.5 раза (Могильникова и др., 2007). Максимальные концентрации ДК в тканях M. trossulus и M. yessoensis из зал. Восток (около 0.1 мг/кг), а также из других районов северо-западной части Японского моря – от 0.01 до 0.3 мг/кг (Stonik et al., 2019) – оказались существенно ниже предельно допустимых показателей.

Несмотря на то, что концентрация ДК в изученных пробах была невысокой, можно предположить, что при формировании интенсивных “цветений” Pseudo-nitzschia (концентрация выше 1 млн кл/л), подобных тем, что наблюдались ранее в Амурском и Уссурийском заливах Японского моря (Стоник, Орлова, 2013), существует высокая вероятность накопления ДК в моллюсках, обитающих в зал. Восток, до опасных для человека и животных значений. Необходимо отметить, что длительное хроническое воздействие даже низких концентраций ДК может быть причиной неврологических нарушений (Lelong et al., 2012). Результаты нашей работы указывают на необходимость проведения круглогодичного мониторинга содержания амнезиотоксина в двустворчатых моллюсках из района исследования.