Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. T. 44, Номер 1, 2026

  1. На главную
  2. Электронные версии
  3. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология
  4. T. 44, № 1, 2026

Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 2026, T. 44, № 1, стр. 58-65

Разработка набора реагентов для выявления РНК вируса желтой лихорадки методом изотермической амплификации

Е. И. Кривошеина 1, *, Е. В. Чуб 1, **, М. Ю. Карташов 1, ***

1 ФБУН ГНЦ ВБ “Вектор” Роспотребнадзора
р.п., Кольцово, Россия

* E-mail: katr962@mail.ru
** E-mail: chub_ev@vector.nsc.ru
*** E-mail: mikkartash@yandex.ru

Поступила в редакцию 31.08.2025
После доработки 09.10.2025
Принята к публикации 09.10.2025

Аннотация

Вирус желтой лихорадки (ВЖЛ), переносимый комарами Aedes aegypti, представляет серьезную угрозу для здравоохранения стран тропических и субтропических регионов, а также вызывает обеспокоенность в странах с умеренным климатом. Вирус провоцирует тяжелые симптомы, включая лихорадку, желтуху и поражение внутренних органов, а смертность от инфекции достигает 20–60%. Единственной эффективной мерой профилактики остается живая вакцина, созданная еще в 1936 г. и активно используемая в эндемичных регионах. Клиническая диагностика болезни затруднена из-за схожести симптомов с другими инфекциями, однако, современные ПЦР-методы обладают высокой точностью и перспективой для быстрого выявления и дифференциальной лабораторной диагностики ВЖЛ. На сегодняшний день изотермические методы амплификации нуклеиновых кислот приобретают все большее значение благодаря своей простоте и независимости от сложных температурных программ. Их использование позволяет применять менее ресурсоемкое и доступное оборудование, что делает данные методы перспективными для разработки экспресс-тестов, пригодных для диагностики непосредственно у постели пациента. Цель работы – разработка набора реагентов для выявления РНК вируса желтой лихорадки методом LAMP с цветовой детекцией. Материал и методы. В качестве анализируемых образцов использовали полученную в данной работе РНК (YFV-РНК-К+), ДНК человека, выделенную из сыворотки крови, а также искусственно контаминированные образцы сыворотки крови РНК гетерологичных вирусов. Биоинформатические методы: анализ полногеномных последовательностей для подбора праймеров; молекулярно-генетические методы: выделение нуклеиновых кислот, реакция обратной транскрипции, ПЦР, изотермическая амплификация, электрофорез в агарозном геле и секвенирование по Сэнгеру. Результаты. Создан экспериментальный набор реагентов для обнаружения РНК ВЖЛ с использованием метода LAMP и визуальной детекцией. Определен предел детекции данного набора (104 копий/мл) и оптимальное время реакции для его достижения. Также была подтверждена его специфичность к генетическому материалу вируса желтой лихорадки и отсутствие реакции на гетерологичные вирусы, такие как денге, Зика и клещевой энцефалит. Заключение. Создание набора реагентов для обнаружения РНК ВЖЛ с помощью метода LAMP позволит определить наличие вируса на ранних этапах заболевания менее чем за 1 ч. с визуальной оценкой результатов. Набор реагентов может быть полезен при лабораторной верификации возбудителя у заболевших людей или наличие РНК ВЖЛ у комаров-переносчиков для исследования возможного распространения вируса как в эндемичных, так и в неэндемичных регионах. Преимуществом использования колориметрического метода детекции является возможность использования термостата вместо дорогостоящего амплификатора с детекцией в режиме реального времени, короткое время реакции (порядка 35–40 мин) и простота интерпретации результатов анализа.

Ключевые слова: вирус желтой лихорадки, петлевая изотермическая амплификация, цветовая детекция

Список литературы

  1. Monath T.P. Yellow fever: an update. Lancet Infect. Dis. 2001; 1(1): 11–20. https://doi.org/10.1016/S1473-3099(01)00016-0

  2. Douam F., Ploss A. Yellow Fever Virus: Knowledge Gaps Impeding the Fight Against an Old Foe. Trends Microbiol. 2018; 26(11): 913–928. https://doi.org/10.1016/j.tim.2018.05.012

  3. Ганушкина Л.А., Таныгина Е.Ю., Безжонова О.В., Сергиев В.П. Об обнаружении комаров Aedes (Stegomyia albopictus Skuse на территории Российской Федерации. Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2012; 1: 3–4. Ganushkina L.A., Tanygina E.Yu., Bezzhonova O.V., Sergiev V.P. About the discovery of the mosquito Aedes (Stegomyia) albopictus Skuse оn the territory of the Russian Federation. Medical Parasitology and parasitic diseases. 2012; 1: 3–4. (In Russ).

  4. Domingo C., Charrel R.N., Schmidt-Chanasit J., Zeller H., Reusken C. Yellow fever in the diagnostics laboratory. Emerg Microbes Infect. 2018; 7(1): 129. https://doi.org/10.1038/s41426-018-0128-8

  5. Theiler M., Smith H.H. The use of yellow fever virus modified by in vitro cultivation for human immunization. J. Exp. Med.1937; 65(6): 787–800.

  6. Иванов А.П., Клеблеева Т.Д., Рогова Ю.В., Иванова О.Е. Разработка инактивированной культуральной вакцины против желтой лихорадки. Вопросы вирусологии. 2020; 65(4): 212–217. Ivanov A.P., Klebleeva T.D., Rogova Y.V., Ivanova O.E. Development of inactivated cultural yellow fever vaccine. Problems of Virology. 2020; 65(4): 212–217. (In Russ). https://doi.org/10.36233/0507-4088-2020-65-4-212-217

  7. McGuinness I., Beckham J.D., Tyler K.L., Pastula D.M. An Overview of Yellow Fever Virus Disease. Neurohospitalist. 2017; 7(4): 157–158. https://doi.org/10.1177/1941874417708129

  8. Barbosa C.M., Di Paola N., Cunha M.P., Rodrigues-Jesus M.J., Araujo D.B. et al. Yellow Fever Virus RNA in Urine and Semen of Convalescent Patient, Brazil. Emerg Infect Dis. 2018; 24(1): 176–178. https://doi.org/10.3201/eid2401.171310

  9. Domingo C., Yactayo S., Agbenu E., Demanou M., Schulz A.R., Daskalow K., Niedrig M. Detection of yellow fever 17D genome in urine. J Clin Microbiol. 2011; 49: 760–762. https://doi.org/10.1128/JCM.01775-10

Дополнительные материалы отсутствуют.

Инструменты

следующая статья выпуска предыдущая статья выпуска содержание выпуска

Молекулярная генетика, микробиология и вирусология

Архивы выпусков Информация о журнале Отправить рукопись в журнал