Молекулярная биология, 2022, T. 56, № 6, стр. 914-914

Репарация двухцепочечных разрывов ДНК, генерируемых CRISPR-Cas9 в Pseudomonas putida KT2440

Н. Шараев a, L. Chacon-Machado ac, О. Мушарова ab, Е. Савицкая a, К. Северинов ab*

a Сколковский институт науки и технологий
143028 Москва, Россия

b Институт молекулярной генетики
119334 Москва, Россия

c Department of Microbiology, Cornell University
NY 14850, Ithaca, USA

* E-mail: severik@waksman.rutgers.edu

Поступила в редакцию 03.05.2022
После доработки 30.05.2022
Принята к публикации 30.05.2022

Полный текст (PDF)

Аннотация

Pseudomonas putida KT2440 ‒ это метаболически универсальная бактерия со значительными перспективами в качестве основного штамма для производства и переработки сложных органических соединений. В отличие от большинства бактерий, P. putida KT2440 кодирует белки Ku и LigD, участвующие в негомологичном соединении концов (NHEJ). Этот путь восстановления двухцепочечных разрывов (DSB) в ДНК обладает мутагенным потенциалом, который может быть использован в сочетании с доступными в настоящее время инструментами редактирования генома, генерирующими программируемые DSB. В этой работе мы исследовали эффект делеции или сверхэкспрессии NHEJ-ассоциированных ферментов P. putida KT2440 на мутациях, генерируемых при репарации Cas9-опосредованных DSB, с двойной целью ‒охарактеризовать NHEJ и изучить, как он функционально взаимодействует с текущим “золотым стандартом” редактирования генов. Результаты нашей работы проливают свет на нематричные механизмы репарации DSB у P. putida KT2440. Представленная информация послужит основой для расширения инструментария генной инженерии этого важного микроорганизма.

Ключевые слова: Pseudomonas putida, двухцепочечная ДНК, репарация DSB, CRISPR-Cas9

Статья представлена авторами на английском языке.

Дополнительные материалы отсутствуют.