Доклады Российской академии наук. Науки о жизни, 2023, T. 512, № 1, стр. 454-459

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Все обследованные ВИЧ-позитивные больные более двух лет принимали ВААРТ. К категории ИН были отнесены пациенты, в крови которых на всем протяжении лечения численность периферических CD4⁺ Т-лимфоцитов оставалась стабильно низкой – менее 350/мкл. Основная группа обследованных лиц была представлена ВИЧ-позитивными ИН прежде инфицированными ВГС, но успешно прошедшими курс противовирусных препаратов прямого действия (ПППД) для лечения гепатита С за 12 и более месяцев до начала исследования (n  =  15). Контрольные группы составили ВИЧ/ВГС коинфицированные ИН, не принимавшие ПППД (n = 15), и относительно здоровые добровольцы без ВИЧ- и ВГС-инфекций (n = 11).

Периферическую кровь забирали натощак из локтевой вены в пробирки, содержащие этилендиаминтетрауксусную кислоту (Guangzhou Improve Medical Instruments Co, Китай). Численность CD4⁺ и CD8⁺ Т-лимфоцитов крови оценивали с использованием коммерческого набора Immunocytometry Systems (BDIS) Simultest (Becton Dickinson, США). Плазму крови отделяли центрифугированием. Уровни цитокинов в плазме оценивали с использованием набора Bio-Plex Pro™ Human Inflammation Panel 1, 37-Plex (Bio-Rad, США) на анализаторе MAGPIX (Luminex Corporation, США). Вирусную нагрузку ВИЧ и ВГС определяли методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с использованием коммерческих наборов АмплиСенс ВИЧ-Монитор-FRT (ООО “ИЛС”, Россия) и ОТ-ГЕПАТОГЕН-С КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ (ДНК-Технология, Россия) соответственно. Терапию ПППД считали успешной при вирусной нагрузке ВГС менее 200 копий/мл (предел чувствительности тест-системы); ВААРТ – при вирусной нагрузке ВИЧ менее 250 копий/мл (предел чувствительности тест-системы).

Статистический анализ и визуализацию данных проводили с помощью языка программирования R (RStudio, Inc. Software, США). Количественные данные в тексте и таблицах представлены в виде медианы и 25–75 перцентилей; категориальные данные – в виде процентов. Для сравнения двух групп количественных данных использовали тест Манна–Уитни; нескольких групп – тест Краскела–Уоллиса; множественные сравнения между группами проводили с помощью критерия Данна. Для сравнения групп категориальных данных использовали точный критерий Фишера. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез приняли равным 0.05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Пациенты трех клинических групп были сопоставимы по возрасту и полу (табл. 1). По сравнению с ВИЧ/ВГС коинфицированными больными ВИЧ-позитивные пациенты, прошедшие курс ПППД, характеризовалась большей продолжительностью заболевания, и дольше получали ВААРТ.

Рис. 1.

Концентрации маркеров системного воспаления в плазме крови ВИЧ-инфицированных и здоровых людей. Группы: 1 – ВИЧ-инфицированные иммунологические неответчики, принимавшие ПППД для лечения гепатита С; 2 – ВИЧ-инфицированные иммунологические неответчики, коинфицированные ВГС; 3 – относительно здоровые добровольцы без ВИЧ- и ВГС-инфекций. * – p < 0.05; *** – p < 0.001; ns – статистически незначимо (критерий Краскела–Уоллиса с последующим тестом по Данну (ANOVA). Данные представлены в виде индивидуальных значений, медиан, 25–75 перцентилей. Вертикальные отрезки отмечают совокупность “невыпадающих” значений. ВИЧ – вирус иммунодефицита человека; ВГС – вирус гепатита С; ПППД – препараты прямого противовирусного действия.

Было показано, что эрадикация ВГС у ВИЧ-позитивных ИН ассоциирована со снижением уровня системного воспаления. Концентрации ряда провоспалительных цитокинов, таких как интерфероны III типа (интерлейкин-28А и интерлейкин-29), а также показателя активности фактора некроза опухоли – sTNF-R2 – статистически значимо снизились после курса ПППД и приблизились к показателям здоровых лиц (рис. 1). Известно, что интерфероны III типа обладают противовирусной активностью: способны напрямую подавлять репликацию и цитопатические эффекты ВГС [7, 8], а также увеличивать уровни экспрессии молекул главного комплекса гистосовместимости I класса и вирус-распознающих рецепторов TLR3 [9].По-видимому, в условиях терапевтически контролируемой ВИЧ-инфекции после полного удаления ВГС из организма снижается необходимость в продукции этих цитокинов. Следует отметить, что интерфероны III типа способны ограничивать пролиферативную способность иммунных клеток: под их воздействием происходит арест клеточного цикла в фазе G1, индуцируется экспрессия регулятора клеточного цикла p21, дефосфорилируется белок ретинобластомы [10, 11]. Также интерфероны III типа негативно влияют на жизнеспособность клеток: увеличивают активность каспаз 3/7 и PARP, способствуют фрагментации ДНК, экспрессии TRAIL, CD95 и TNFSF10 [10–12]. Исходя из вышеизложенного, снижение уровня интерферонов III типа в кровотоке может стать позитивным фактором в регенерации иммунитета у ВИЧ-инфицированных ИН.

Вместе с тем мы показали, что эрадикация ВГС у ВИЧ-позитивных субъектов не сопровождается полным подавлением системного воспаления (табл. 2). Так, снижение концентрации части провоспалительных цитокинов и маркеров воспаления было статистически незначимым (интерферон-а2, интерферон-бета, sCD163) или вовсе отсутствовало (интерферон-гамма, интерлейкин-8). Полученные данные согласуются с результатами исследований ВИЧ/ВГС коинфицированных лиц, отвечающих на ВААРТ приростом численности CD4⁺ Т-клеток [13]: как и до терапии, через 12 мес после приема ПППД уровни многих провоспалительных цитокинов, а также доля активированных Т-лимфоцитов в крови пациентов превосходили аналогичные показатели здоровых лиц.

Примечательно, что согласно данным литературы у ВГС моноинфицированных больных лечение гепатита С также не приводит к восстановлению показателей иммунной активации до уровней, отмечаемых у здоровых людей, что, по-видимому, связано с повреждением печени. Так, у лиц, прошедших лечение от гепатита С, многие параметры, свидетельствующие о продолжающемся воспалительном процессе, остаются повышенными через 9 мес после окончания приема ПППД [14]. Однако у моноинфицированных гепатитом С субъектов, в отличие от ВИЧ/ВГС коинфицированных пациентов, эрадикация ВГС все же приводит к снижению концентрации маркера активации макрофагов sCD163 [15] и индуцируемого интерфероном цитокина IP-10 [16], уменьшению экспрессии интерферон-стимулированных генов в клетках печени и периферической крови [17]. Очевидно, что продолжительное течение как ВИЧ-инфекции, так и гепатита С истощает ресурсы иммунной системы и повреждает печень. Накопленные нарушения у ВИЧ-позитивных лиц, прошедших курс ПППД, поддерживают воспалительный процесс, показатели которого остаются повышенными даже через два года после эрадикации ВГС.

Важно указать, что, несмотря на частичное снижение уровня системного воспаления, большинство обследованных нами ВИЧ-инфицированных больных, прошедших курс ПППД, не смогли преодолеть состояние иммунологического неответа: только у двух субъектов число CD4⁺ Т-клеток поднялось выше порогового значения 350/мкл. Тем не менее использование ПППД для лечения гепатита С оказало положительное влияние на состояние пула Т-лимфоцитов у ИН, а именно привело к статистически значимому увеличению показателя соотношения CD4⁺/CD8⁺ Т-клеток (рис. 2). Это было обусловлено как ростом содержания CD4⁺ Т-лимфоцитов, так и снижением количества CD8⁺ Т-клеток в крови прошедших анти-ВГС терапию ВИЧ-позитивных ИН. Ранее было установлено, что экспансия CD8⁺ Т-лимфоцитов при ВИЧ/ВГС коинфекции связана с системным воспалением [6]. Поэтому сокращение числа периферических CD8⁺ Т-клеток может рассматриваться как благоприятный показатель. В свою очередь увеличение числа CD4⁺ Т-лимфоцитов в крови больных, по-видимому, связано не с формированием новых Т-клеток в тимусе или посредством гомеостатической пролиферации, но с перераспределением клеток из печени и лимфатических узлов в периферическую кровь. Об этом свидетельствует тот факт, что лечение ВГС-инфекции сопровождается увеличением доли CD4⁺ Т-клеток, экспрессирующих CXCR3 (рецептор для IP-10) [18].

Рис. 2.

Соотношение количества CD4⁺/CD8⁺ Т-лимфоцитов в периферической крови ВИЧ-инфицированных иммунологических неответчиков, принимавших и не принимавших ПППД для лечения гепатита С. Группы: 1 – ВИЧ-инфицированные иммунологические неответчики, принимавшие ПППД; 2 – ВИЧ-инфицированные иммунологические неответчики, коинфицированные ВГС. ** – p < 0.01 (критерий Манна–Уитни). Данные представлены в виде индивидуальных значений, медиан, 25–75 перцентилей. ВИЧ – вирус иммунодефицита человека; ВГС – вирус гепатита С; ПППД – противовирусные препараты прямого действия.

Необходимо отметить, что согласно данным литературы у ВИЧ/ВГС коинфицированных больных обусловленная ПППД эрадикация ВГС не влияет на численность CD4⁺ Т-клеток [19, 20] или соотношение CD4⁺/CD8⁺ Т-лимфоцитов [19]. Данные исследования были проведены без учета эффективности иммунологического ответа пациентов на ВААРТ. Эффект курса ПППД для лечения ВГС на пул Т-лимфоцитов ВИЧ-инфицированных ИН был исследован нами впервые.

Таким образом, эрадикация ВГС противовирусными препаратами прямого действия у ВИЧ-позитивных иммунологических неответчиков частично снижает уровень системного воспаления, однако его показатели остаются повышенными по сравнению с таковыми у лиц без ВИЧ- и ВГС-инфекций. На этом фоне у ВИЧ-позитивных иммунологических неответчиков происходит лишь незначительный прирост абсолютного количества CD4⁺ Т-лимфоцитов в периферической крови. По-видимому, восстановление иммунной системы у ВИЧ-инфицированных иммунологических неответчиков, прошедших лечение от гепатита С, требует времени и может быть неполным.