Молекулярная биология, 2022, T. 56, № 2, стр. 323-324

Клонирование и экспрессия гена ORF19.2286, выделение и очистка дезоксигипузингидроксилазы патогенных для человека дрожжей Candida albicans

Э. Агбоигба a, Е. Кучаев ab, Н. Гараева a, Э. Клочкова a, А. Варфоломеев a, К. Усачев ab*, М. Юсупов ac, Ш. Валидов ab**

a Казанский (Приволжский) федеральный университет
420008 Казань, Россия

b Федеральный исследовательский центр “Казанский научный центр Российской академии наук”
420008 Казань, Россия

c Institute of Genetics and Molecular and Cellular Biology (IGBMC)
67400 Illkirch-Graffenstaden, France

* E-mail: k.usachev@kpfu.ru
** E-mail: szvalidov@kpfu.ru

Поступила в редакцию 04.03.2021
После доработки 07.10.2021
Принята к публикации 07.10.2021

Аннотация

Candida albicans (C. albicans) ‒ патогенный гриб, вызывающий поверхностные и гематогенные инфекции у пациентов с ослабленным иммунитетом или лиц с несбалансированной микрофлорой. Заболеваемость клиническим кандидозом ежегодно растет, в связи с чем его эффективная терапия все более востребована. Для разработки лекарственных препаратов необходимо выявление мишеней, в том числе направленных на нарушение посттрансляционных модификаций жизненно важных белков C. albicans. Ген ORF19.2286 в геноме C. albicans кодирует ортолог дезоксигипузингидроксилазы (DOHH) человека. В представленной работе структурный ген ORF19.2286 штамма C. albicans SC5314 экспрессировали в Escherichia coli в виде конструкции GB1-CaDOHH с 6-гистидиновым тегом (6×His) на N-конце рекомбинантного белка. После нескольких последовательных этапов очистки 6×His-GB1 удаляли в результате обработки протеазой вируса крапчатости табака (TEV). Установлено несколько различий в аминокислотной последовательности DOHH из C. albicans и животных, что может быть использовано в дальнейшем для выбора сайтов связывания антимикробных препаратов с CaDOHH. В работе приведен протокол гетерологичной экспрессии и очистки белка DOHH из C. albicans, который можно использовать в дальнейшем при подготовке образцов для рентгеноструктурного анализа.

Ключевые слова: дезоксигипузингидроксилаза, Candida albicans, eIF5α, посттрансляционная модификация, рибосома, трансляция

Дополнительные материалы отсутствуют.