1. На главную
  2. Электронные версии
  3. Прикладная биохимия и микробиология
  4. T. 59, № 6, 2023

Прикладная биохимия и микробиология, 2023, T. 59, № 6, стр. 581-588

Конъюгационная система доставки векторов для молекулярного клонирования в клетки бактерий рода Bacillus

А. С. Гуринович 1, И. А. Федюшко 1, М. А. Титок 1, *

1 Белорусский государственный университет, биологический факультет, кафедра микробиологии
220030 Минск, Республика Беларусь

* E-mail: ma_titok@bsu.by

Поступила в редакцию 03.05.2023
После доработки 29.05.2023
Принята к публикации 03.07.2023

Аннотация

Разработана система доставки векторов для молекулярного клонирования в клетки бактерий рода Bacillus. Особенность созданной системы заключается в использовании плазмиды pBS72, обеспечивающей конъюгационный перенос полученного условно летального вектора pKS1mob в клетки исследуемых бактерий. Способность вектора pKS1mob реплицироваться в клетках Escherichia coli и B. subtilis при пониженной температуре (30°C), наличие двух полилинкеров вокруг гена канамицинрезистентности позволяет клонировать в его состав фрагменты целевых генов с использованием традиционных генно-инженерных подходов. Инактивация гена rok в плазмиде pBS72 позволила с высокой эффективностью трансформировать содержащий ее штамм сконструированным вектором pKS1mob. Скрещивание донорного штамма B. subtilis 168, содержащего конъюгативную pBS72 и мобилизуемую pKS1mob плазмиды, со штаммом-реципиентом рода Bacillus позволило ввести в него плазмиду pKS1mob. Показана возможность использования созданной системы для инактивации гена codY бактерий Bacillus licheniformis.

Ключевые слова: B. subtilis, плазмида pBS72, Rok белок, вектор pKS1mob, конъюгационный перенос, компетентность

Список литературы

  1. Harwood C.R., Mouillon J.M., Pohl S., Arnau J. // FEMS Microbiol. Rev. 2018. V. 42. P. 721–738. https://doi.org/10.1093/femsre/fuy028

  2. Burton A.T., Kearns D.B. // J. Bacteriol. 2020. V. 202. № 18. P. e00290-20. https://doi.org/10.1128/JB.00290-20

  3. Singh P.K., Ramachandran G., Duran-Alcalde L., Alonso C., Wu L.J., Meijer W.J. // Environ. Microbiol. 2012. V. 14. № 10. P. 2812–2825. https://doi.org/10.1111/j.1462-2920.2012.02819x

  4. Jeong D.E., Kim M.S., Kim H.R., Choi S.K. // Front. Microbiol. 2022. V. 13. P. 802040. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.802040

  5. Brophy J.A.N., Triassi A.J., Adams B.L. // Nat. Microbiol. 2018. V. 3. P. 1043–1053. https://doi.org/10.1038/s41564-018-0216-5

  6. Gurinovich A.S., Titok M.A. // Microbiology. 2022. V. 91. № 4. P. 395–408. https://doi.org/10.1134/S002626172230018X

  7. Titok M.A., Chapuis J., Selezneva Y.V., Lagodich A.V., Prokulevich V.A., Ehrlich S.D., Jannière L. // Plasmid. 2003. V. 49. № 1. P. 53–62. https://doi.org/10.1016/s0147-619x(02)00109-9

  8. Gurinovich A.S., Titok M.A. // Microbiology. 2020. V. 89. № 6. P. 660–669. https://doi.org/10.1134/S0026261720060065

  9. Shatalin K.Y., Neyfakh A.A. // FEMS Microbiology Letters. 2005. V. 245. № 2. P. 315–319. https://doi.org/10.1016/j.femsle.2005.03.029

  10. Harwood C.R., Cutting S.M. Molecular Biological Methods for Bacillus. / Ed. C.R. Harwood and S.M. Cutting Chichester, New York: Wiley, 1990. 581 p.

  11. Anagnostopoulos C., Spizizen J. // J. Bacteriol. 1961. V. 81. № 5. P. 741–746. https://doi.org/10.1128/jb.81.5.741-746.1961

  12. te Riele H., Michel B., Ehrlich S.D. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V. 83. P. 2541–2545. https://doi.org/10.1073/pnas.83.8.2541

  13. Sambrook J., Fritsch E., Maniatis T. Molecular Cloning: a Laboratory Manual, 2nd Ed. N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. 468 p.

  14. Poluektova E.U., Fedorina E.A., Lotareva O.V., Prozorov A.A. // Plasmid. 2004. V. 52. P. 212–217. https://doi.org/10.1016/j.plasmid.2004.07.001

  15. Fujita Y, Satomura T, Tojo S, Hirooka K. // J. Bacteriol. 2014. V. 196. P. 3793–3806. https://doi.org/10.1128/JB.02055-14

  16. Hoa T.T., Tortosa P., Albano M., Dubnau D. // Mol. Microbiol. 2002. V. 43. № 1. P. 15–26. https://doi.org/10.1046/j.1365-2958.2002.02727.x

  17. Smits W.K., Grossman A.D. // PLoS Genet. 2010. V. 11. № 6. P. e1001207. https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1001207

Дополнительные материалы отсутствуют.

Инструменты

следующая статья выпуска предыдущая статья выпуска содержание выпуска

Прикладная биохимия и микробиология

Архивы выпусков Информация о журнале Отправить рукопись в журнал